一、试剂 CaCl2 溶液( 2mol/L )、完全培养基、DMEM 培养基、乙醇(或异丙醇) (70% )、胎牛血清( FBS )、HBS 溶液(2X)、HEPES (2.5mmol/L, pH 7.3)、OptiMEM+ 1 %青霉素/链霉素( P/S )、OptiMEM , 无P/S、pCMVDΔR8.91 质粒、pUMVC 质粒、pVSV- G 质粒 …
阅读更多 »是否有嘌呤霉素筛选标记的病毒的病毒滴定protocol,看了好多好多不一样的?这个有比较权威又大众的滴度操作流程吗?
关于使用嘌呤霉素筛选标记(puromycin resistance marker)的慢病毒(lentivirus)或逆转录病毒(retrovirus)进行病毒滴定(virus titration)的 protocol,确实有不少不同的做法,这是因为不同实验室根据自己的系统和需求进行了优化。但是,有一些权威且广泛应用的标准流程可以作为通用参考,下面是整理的一个 …
阅读更多 »293T分别包装两种病毒,浓缩后混合感染鼠CD8+ T细胞可以吗?
原则上可以,具体要看以下几个条件: 步骤可行性: 分别包装:在293T细胞中分别转染两种构建(比如psPAX2 + pMD2.G + 各自的载体),收集病毒上清; 浓缩:超速离心或PEG浓缩,两种病毒分别处理; 混合感染:感染前混合两种浓缩后的病毒,用于感染小鼠CD8+ T细胞。 技术要点: T细胞激活:CD8+ T细胞对逆转录病毒天然不易感染,通常需要先用 …
阅读更多 »ECL发光液使用过程中注意事项
1. 发光液不宜暴露于强光下时间过久,请避光保存,在暗室操作。 2. 为了得到最佳的曝光效果,优化一抗、二抗的稀释比例。 3. 请选择高质量保鲜膜。 4. 对于Enlight发光液,应避免使用NaN3 回收HRP 偶联的抗体,因为NaN3 能抑制HRP 的活性。
阅读更多 »Cell Death & Disease | 西北农林科技大学报道:如何有效增肌?
该团队在《Cell Death & Disease》期刊上发表了题为“CircRILPL1 promotes muscle proliferation and differentiation via binding miR-145 to activate IGF1R/PI3K/AKT pathway”的论文。研究人员利用体内转染试剂(En …
阅读更多 »RNA转染影响因素
1.转染试剂 转染中要额外注意的就是转染试剂应该是确认无RNase污染的,而且也尽量避免和质粒DNA转染混用—即使试剂本身兼容DNA和RNA转染,因RNA与DNA大小不同,转染条件不同,所需的试剂也应不同,所以RNA专用的转染试剂会更好一些。比如Entranster试剂. 2.RNA转染时RNA的用量 RNA转染的用量必须参考RNA转染试剂说明,因为RNA和 …
阅读更多 »体内转染(entranster)与荷花碱通过调节nrf2信号对缺血性卒中线粒体的保护作用研究
缺血性中风是导致死亡和长期残疾的主要原因。为了克服临床治疗的局限性,迫切需要有前景的神经保护化合物。神经保护剂仅限于单一靶向药物,这进一步限制了其临床疗效。由于大脑特殊的能量需求,以线粒体为中心的能量微环境是缺血性脑卒中复杂病理学研究的新热点。现分享一篇体内转染(entranster)与荷花碱通过调节nrf2信号对缺血性卒中线粒体的保护作用研究的文献,以供参 …
阅读更多 »siRNA转染后目标基因不降反升的原因
一、生物学与分子机制相关原因 1️⃣ 负反馈调控 (feedback regulation) 某些基因被抑制后,会触发细胞的代偿机制。 例如,目标基因下调后,上游转录因子或信号通路被激活,从而 反向上调目标基因 的转录。 特别常见于信号通路核心分子(如 MAPK、PI3K、NF-κB、p53 等)的 knockdown 实验。 建 …
阅读更多 »CCK8实验之前,是否需要先检测一下培养基和CCK8是否会反应?
需要,可用一个孔检测一下,因为有培养基中可能含有氧化还原反应的物质,在正式实验之前有必要先确认培养基和CCK8 是否反应。一般正常在的OD 值应该在0.4 以下。 如需了解更多关于cck8产品的信息,请点击https://www.engreen.com.cn/cck-8-kit
阅读更多 »RNA转染与利拉鲁肽和MC3T3-E1细胞凋亡研究
近年来,对肠促胰岛素和骨的关系的兴趣不断增加。之前的研究已经表明胰高血糖素样肽-1(GLP-1)及其受体激动剂对骨骼代谢具有有益的合成代谢作用,如通过肠-骨轴促进成骨细胞的增殖和分化。然而,对于GLP-1对成骨细胞凋亡的影响及其相关机制并不清楚。现分享一篇RNA转染(Entranster)与利拉鲁肽和MC3T3-E1细胞凋亡研究的文献,以供参考。
阅读更多 »
英格恩生物技术博客 生物实验干货分享