英格恩技术资料

目的基因不能直接整合到大多数真核细胞，常用的手段是将目的基因包装成病毒来感染细胞，从而得到表达满足实验需求。病毒有很多种，常见的有慢病毒和腺病毒。关于慢病毒和腺病毒的原理以及特别前面的文章中都有介绍过，可以搜索关键字查看。今天主要介绍病毒感染细胞的实验流程。 1.构建目的基因到载体 构建手段 一般是根据原始质粒信息确定克隆方案，有以下两种手段。 1）如果原始 …

下面以Entranster-R4000试剂为例，说一下siRNA转染步骤（24孔板） 1.提前1天细胞种植 贴壁细胞：提前一天将细胞种植在24孔板中，以转染时细胞汇合度（Confluence）在30％左右为宜，转染前全培养基总量为0.45ml。 悬浮细胞：采用对数生长期的细胞，数量为常规培养细胞数的1/3进行转染实验。如某细胞常规培养的细胞数是6×105，那 …

1 电场参数 电场是电转染的重要因素，细胞在电场的作用下，膜通透性增加或是形成小孔，以完成转染过程。因此电场强度是应该被优化的主要参数。电场强度不能过高，过高会增加细胞的死亡率；也不能过低，过低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。因此，一个适宜的电场强度至关重要。 不同细胞系具有不同的最佳场强值，其确定方法除了实验直接测定比较不同场强下转染率的高低外，还可以 …

冠状动脉阻塞继发心肌缺血（MI）是一种严重的心脏病，发病率和死亡率都很高。交感传入通路是心肌梗死信号传导的关键。背根神经节（DRG）神经元的感觉输入在控制交感神经输出到心脏的过程中起着重要作用。      心肌缺血可激活交感传入神经末梢，常伴有血压升高和交感传出兴奋，引起交感兴奋反射。冠状动脉闭塞模型还通过激活缺血左心室的感觉神经末梢来诱导交感神经反射。交感 …

炎症加重了脑出血（ICH）的致命后果。近年来，许多研究发现，核因子-κB（NF-κB）是一种重要的转录因子，可引起ICH血液周围区域的炎症。NF-κB必需调节剂（nemo）-结合域（nbd）肽，一种跨越ikkα或ikkβ的nbd的细胞渗透性肽，作为NF-κB的高特异性抑制剂发挥作用。这种肽能负调节NF-κB通路。现分享一篇体内转染（entranster）与N …

       一般来说，方波脉冲的理论起始条件可通过指数衰减参数来确定，即在保持电容不变的情况下，将脉冲长度减半，电压增加约10%。之后的优化可在理论计算的脉冲电压附近以10 V为梯度增减。如果不知道指数衰减脉冲条件，可通过测试电压、电容和脉冲长度范围找到最佳的方波脉冲条件。对于engreen的Entranster-E …

1.每次动物实验，需要准备什么东西，器材？ ①转染的核酸，如siRNA，miRNA，mimic、inhibitor，也可以转染DNA。 ②转染试剂和动物。 ③进行注射的器材。 2.可以转染的核酸都有什么？细胞实验的核酸可以用吗？ 可以转染小片断RNA如siRNA，miRNA，mimic、inhibitor，也可以转染DNA。进行体外细胞实验的核酸就可以。但要 …

SIRT3是NAD+依赖性的线粒体蛋白脱乙酰酶，参与调节中枢代谢和线粒体蛋白稳定。SIRT3在肾透明细胞癌（CCRCC）中被下调，这是肾癌的最常见形式。尽管ccRCC具有典型的Warburg样表型、线粒体功能障碍和脂肪沉积增高的特征，但SIRT3是否参与肿瘤的发生和发展尚不清楚。现分享一篇ECL发光液（enlight）与siRT3过表达抑制肾肿瘤细胞生长研究 …

环状RNA在许多生物系统中被发现。它们大多被认为是microRNA的分子“海绵”，具有许多未知的生物学活性。小干扰RNA作为许多非编码RNA之一，已成为基因表达调控和药物治疗的重要工具。虽然由siRNA介导的靶mRNA裂解具有高度的序列特异性，意外“脱靶”沉默内源基因在细胞中也观察到，这限制了siRNA的进一步应用。脱靶效应的siRNA也能诱导多种细胞凋亡。 …

       CCK8溶液自身因为高浓度的PMS的存在而具有一点毒性。但是，加到培养基中的CCK8是没有毒性的，因为被稀释了10倍。因此，长时间的培养，如过夜或者培养数天是可以的。同一个细胞培养液在CCK8检测后还可以用于其他细胞增殖检测，如结晶紫检测，中性红检测或者DNA荧光检测等。由于每种细胞对于CCK8的耐受力都不同，因此在需要进行长时间培养时，先检测 …