英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
常见问题 解决对策两块玻璃板之间灌胶，胶总是不平 玻璃没有洗干净，应该洗得很干净 …
阅读更多 »western-blot的实验结果的影响因素有哪些？
1. 样品质量。所抽取样品的蛋白含量，蛋白变性是否充分等等，还有，蛋白样品的PH值是否在7~8之间。这会直接影响到样品浓缩的效果。此外，蛋白样品是否降解、目的蛋白是否已抽取充分都会对最终结果的可靠性有影响。 2. 凝胶质量。不连续SDS-PAGE胶对凝胶的要求较高，分离胶的PH值应在8.8左右，而浓缩胶的PH应在6.8左右，最好不要差过0.5个PH单位，因为 …
阅读更多 »western-blot实验过程中应注意的几个方面
1. 样品质量。所抽取样品的蛋白含量，蛋白变性是否充分等等，还有，蛋白样品的PH值是否在7~8之间。这会直接影响到样品浓缩的效果。此外，蛋白样品是否降解、目的蛋白是否已抽取充分都会对最终结果的可靠性有影响。 2. 凝胶质量。不连续SDS-PAGE胶对凝胶的 …
阅读更多 »质粒DNA转染实验的要点
1， 质粒的构建：启动子的选择 启动子的选择对于转染基因的有效表达是非常重要的。对于转染过程本身虽然无甚影响，但是对转染结果却有着微妙的影响。 2， 质粒的大小和质量 线性化还是超螺旋会影响转染结果：超螺旋质粒的转染效率比线性DNA高得多，特别是瞬时转染。而线性化DNA转染的整合几率高。质粒太大了转染会困难一些。毕竟，相对致密、较小的外源异物被细胞内吞的几率 …
阅读更多 »如何应对悬浮细胞转染难题？
悬浮细胞是指细胞生长不依赖支持物表面，在培养液中呈悬浮状态生长，如淋巴细胞。在实验室经常会遇到悬浮细胞的转染，其和贴壁细胞转染还是有很大不同的。 目前大多数实验室用的是脂质体类的转染试剂，脂质体转染是基于电荷吸引原理，先形成脂质体-DNA复合物，散布在细胞周围，然后通过细胞的内吞作用，将目的基因导入细胞内，而脂质体复合物与贴壁细胞的接触机会比悬浮细胞 …
阅读更多 »世界上最遥远的距离之荧光定量PCR
世界上最遥远的距离不是天涯海角，而是我天天和你在一起，你却不了解我。 荧光定量PCR常做，相关概念常说，可它们到底啥意思？ 荧光定量PCR中基线、阈值、Ct值、扩增曲线、熔解曲线等基本概念 基线（Baseline）：是指在PCR扩增反应的最初数个循环里，荧光信号变化不大。接近一条直线，这样的直线即是基线。 荧光域值（threshold）的设定：一般将 PCR …
阅读更多 »如何做好细胞转染实验？
1．选择合适的转染试剂 不同细胞系转染效率通常不同，但细胞系的选择通常是根据实验的需要，因此在转染实验前应根据实验要求和细胞特性选择适合的转染试剂。每种转染试剂都会提供一些已经成功转染的细胞株列表和文献，通过这些资料可选择最适合实验设计的转染试剂。当然，最适合的是高效、低毒、方便、廉价的转染试剂。如Entranster试剂。 2．保持最佳的细胞状态 一般低的 …
阅读更多 »实验室安全对 EB say “NO”
做过核酸电泳的应该都知道核酸染料。每次电泳前将核酸染料与融化的琼脂糖凝胶混合制板，凝胶凝固后即可进行电泳，前染有利于节约时间。现在实验室用的核酸染料大部分应该都是安全的了，EB的替代品都纷纷登场了。 EB，即溴化乙锭。EB属于核酸分子嵌入剂，早年间常用于琼脂糖凝胶电泳的核酸染料。EB本身在紫外下不发光，能与单链、双链甚至三链DNA高效结合并发出明亮的橙色荧光 …
阅读更多 »western-blot实验影响因素有哪些？
1. 样品质量。所抽取样品的蛋白含量，蛋白变性是否充分等等，还有，蛋白样品的PH值是否在7~8之间。这会直接影响到样品浓缩的效果。此外，蛋白样品是否降解、目的蛋白是否已抽取充分都会对最终结果的可靠性有影响。 2. 凝胶质量。不连续SDS-PAGE胶对凝 …
阅读更多 »为什么需要替代病毒转染?
在细胞相关的实验操作中，对于一些按常规方法难以转染甚至无法转染的细胞，通过病毒介导的实验能够大大提高基因的转导效率，以达到目的基因的高效瞬时表达。 病毒转染包括以下步骤：1构建载体 2包装提纯病毒 3感染靶细胞。以慢病毒为例。 慢病毒（Lentivirus）载体是以HIV-1（人类免疫缺陷I型病毒）为基础发展起来的基因治疗载体。区别一般的逆转录病毒载体，它对 …
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