英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
1.组织培养试剂 优化细胞生长条件。只使用新鲜配制的培养基和添加剂，并经可能减少所用试剂的变更。 基础培养基—目前所使用的各种市售培养基(如，RPMI 1640和DMEM)。培养基的成分包括营养物质(氨基酸，葡萄糖)，维生素，无机盐，和缓冲物质。有些成分非常不稳定，因此如果不在使用时新鲜加入就可能会产生问题。务必要使培养基避光保存。因为已知有一些组分和缓冲物 …
阅读更多 »什么是siRNA？
小干涉RNA（siRNA）：是在RNA干涉过程中人工体外合成的小片段RNA，由约20个碱基对组成，包括5个磷酸盐，2个核苷和3个悬臂。 RNA干涉（RNAi）在实验室中是一种强大的实验工具，通过这种方式，利用具有同源性的双链RNA（dsRNA）诱导序列特异的目标基因的沉默，迅速阻断基因活性。SiRNA在RNA沉默通道中起中心作用，是对特定信使RNA（mRNA …
阅读更多 »悬浮细胞的siRNA转染步骤
悬浮细胞的siRNA转染操作步骤，以24孔板siRNA转染为例 1.提前1天细胞种植 悬浮细胞：采用对数生长期的细胞，数量为常规培养细胞数的1/3进行转染实验。如某细胞常规培养的细胞数是6×105，那么就用2×105的细胞进行转染。 2.转染过程 ⑴取0.67ug(50pmol)的siRNA，加入一定量无血清稀释液，充分混匀，制成RNA稀释液，终体积为2 …
阅读更多 »电转染实验时，对于指数衰减形式的脉冲条件是什么？
对于Entranster-E电转染试剂，当使用0.4cm电转杯时，大多数细胞类型的指数衰减脉冲条件在200-300V的电压范围和800-1000μF的电容范围内。对于0.2 cm电转杯时，其范围分别为80-160 V和800-1000μF。对于使用0.4 cm电转杯的电穿孔实验，测试电压范围为200–30 …
阅读更多 »悬浮细胞的siRNA转染操作步骤
悬浮细胞的siRNA转染操作步骤，以24孔板siRNA转染为例 1.提前1天细胞种植 悬浮细胞：采用对数生长期的细胞，数量为常规培养细胞数的1/3进行转染实验。如某细胞常规培养的细胞数是6×105，那么就用2×105的细胞进行转染。 2.转染过程 ⑴取0.67ug(50pmol)的siRNA，加入一定量无血清稀释液，充分混匀，制成RNA稀释液，终体积为25μ …
阅读更多 »做好siRNA细胞转染实验的秘诀
1.纯化siRNA siRNA的浓度和纯度对转染实验非常重要。为得到高纯度的siRNA，推荐用玻璃纤维结合，洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸，小的寡核苷酸，蛋白和盐离子。注意：化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化（即PAGE胶纯化）。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致siRNA转染实验失败。由于实验环境中RNA酶普遍存在，如皮 …
阅读更多 »体积分数酸、碱溶液的配制
CCK8与射频消融不足诱导的自噬和残余肝细胞癌快速进展研究
目前，射频消融术（RFA）已成为治疗肝细胞癌（HCC）最广泛的方法。然而，越来越多的证据表明，RFA不足（IRFA）的发生可能导致患者体内残留HCC的快速发展，这可能极大地阻碍使用该技术的有效性和患者所获的益处。尽管已经做出了许多努力，但目前的研究文献综述还没有完全阐明导致IRFA后残余HCC快速进展的潜在机制。现分享一篇CCK8（engree …
阅读更多 »如何应对悬浮细胞转染难题？
悬浮细胞是指细胞生长不依赖支持物表面，在培养液中呈悬浮状态生长，如淋巴细胞。在实验室经常会遇到悬浮细胞的转染，其和贴壁细胞转染还是有很大不同的。 目前大多数实验室用的是脂质体类的转染试剂，脂质体转染是基于电荷吸引原理，先形成脂质体-DNA复合物，散布在细胞周围，然后通过细胞的内吞作 …
阅读更多 »siRNA转染过程中常见问题及解答
问：siRNA导入细胞有哪些方法，哪种最好？ 答：siRNA导入细胞有以下几种方法：化学转染技术、电穿孔法、磷酸钙共沉淀技术、显微注射和载体导入技术。选择时应该依据实验条件考虑以下因素：细胞对转入方式的承受能力、细胞对病毒侵染的易感性、细胞的生长特性等。对贴壁细胞来说化学转染技术是最为常用的方法，而对悬浮细胞则采用电穿孔法效果较好。 问：哪种转染试剂效果好？ …
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