电转染实验时,确定每种细胞类型的最佳细胞密度,以最大限度地提高电穿孔效率。在随后的实验中以这个细胞密度为标准检验实验的重复性。对于大多数悬浮细胞,建议电穿孔时的细胞密度为10×10^6细胞/ml。对于贴壁细胞,建议细胞密度范围为1-5×10^6细胞/ml。 如需了解更多关于电转染试剂的信息,请点击 …
阅读更多 »为什么脂质体细胞转染试剂毒性大?
已有众多的文献报道,脂质体本身会参与细胞生理活动,引起基因表达的上调或下调。如参与PKC(蛋白激酶C)通路调节(Biochemistry.1992 Sep 22;31(37): 9025-30);如抑制ATP酶的活性(Biochim Biophys Acta.2008 Apr;1777(4):362-8);如与线粒体膜发生作用(J Biol Chem. 19 …
阅读更多 »脂质体细胞转染试剂的缺点
已有众多的文献报道,脂质体本身会参与细胞生理活动,引起基因表达的上调或下调。如参与PKC(蛋白激酶C)通路调节(Biochemistry.1992 Sep 22;31(37): 9025-30);如抑制ATP酶的活性(Biochim Biophys Acta.2008 Apr;1777(4):362-8);如与线粒体膜发生作用(J Biol Chem. 19 …
阅读更多 »RNA转染效率低的原因
RNA转染效率低,可能的原因: · 转染试剂不适合。建议选择RNA专用转染试剂,如Entranster试剂。 · 转染试剂和RNA的量不够,或者比例不对。优化实验条件,调整试剂和RNA用量,优化二者比例。 · 检测时间有问题。适当调整检测时间。 · RNA质量问题。选择纯度高的RNA。 · 细胞状态不佳。调整细胞状态,调整细胞融合度。
阅读更多 »如何解决悬浮细胞难转染问题?
悬浮细胞是指细胞生长不依赖支持物表面,在培养液中呈悬浮状态生长,如淋巴细胞。在实验室经常会遇到悬浮细胞的转染,其和贴壁细胞转染还是有很大不同的。 目前大多数实验室用的是脂质体类的转染试剂,脂质体转染是基于电荷吸引原理,先形成脂质体-DNA复合物,散布在细胞周围,然后通过细胞的内吞作用,将目的基因导入细胞内,而脂质体复合物与贴壁细胞的接触机会比悬浮细胞 …
阅读更多 »CCK8实验中,设定参比波长的目的是什么?必须设定吗?
不一定要设定。CCK8试剂在参比波长没有吸光度。设定参比波长的目的是为了取出由于样品混浊所带来的吸收。 如需了解更多关于cck8产品的信息,请点击https://www.engreen.com.cn/cck-8-kit
阅读更多 »细胞电转染实验注意事项
1. 选择合适的电场强度 合适的电场强度对于电转染实验非常重要,电场强度不能过高,过高会增加细胞的死亡率;也不能过低,过低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同细胞系具有不同的最佳场强值,实验前应测定所转染细胞系的最佳电场强度。 2. 细胞的选择 用 …
阅读更多 »如何做好细胞转染实验?
1.选择合适的转染试剂 不同细胞系转染效率通常不同,但细胞系的选择通常是根据实验的需要,因此在转染实验前应根据实验要求和细胞特性选择适合的转染试剂。每种转染试剂都会提供一些已经成功转染的细胞株列表和文献,通过这些资料可选择最适合实验设计的转染试剂。当然,最适合的是高效、低毒、方便、廉价的转染试剂。如英格恩的 …
阅读更多 »细胞转染效率低的陷阱
细胞转染是细胞生物学和分子生物学的一种常用的技术手段。而转染效率低下却是实验人员经常遇到的问题,尤其是原代细胞转染,转染难度更大。现分享几个细胞转染实验常见的几个陷阱,望实验人员能够注意。 1.准备不足 做细胞转染的时候,在开展正式实验前要多做预试验,优化转染条件。优化转染条件包括:转染试剂的用量、DNA密度、细胞密度、试剂和DNA …
阅读更多 »western-blot化学发光(ECL)时,胶片上条带很浓怎么办?
可通过以下几个方面进行改进: 1. 可减少蛋白上样量; 2. 降低一抗二抗稀释度,减少抗体孵育时间; 3. 如果背景深的话,则要把发光液沥干些再压片;如果背景不深则需减少发光时间和显影时间。 4.选择合适的发光液,比如Enlight。
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