2026年 1 月 28日, 星期三
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western-blot化学发光(ECL)出现非特异性条带,怎么办?

出现杂带或非特异条带的原因可能有以下几个方面: 1. 蛋白上样量过大。可降低蛋白上样量。 2. 一抗是多克隆抗体,或一抗、二抗浓度太高。可更换成单克隆抗体,或降低抗体浓度,缩短抗体孵育时间,优化一抗和二抗的使用浓度。 3. 洗膜不充分。可增加洗膜次数和Buffer用量,延长洗膜时间,或在Wash Buffer中添加终浓度0.05%的Tween-20。 4. …

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怎样提高病毒感染实验效率?

可使用病毒感染增强剂envirus提高病毒的感染效率,下面以慢病毒为例,说一下实验过程。 1.提前一天细胞铺板 提前一天将细胞种植在24孔板中,以感染时细胞融合度在50%左右为宜(悬浮细胞根据需要调整,不要采用过高的细胞密度)。 2.感染 ⑴将2ul的Envirus-LV用25μl无血清稀释液稀释,充分混匀,制成Envirus-LV稀释液。4℃静置5分钟。 …

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细胞重组编程,比干细胞更牛

人体的很多疾病都是由于身体内某种特定的细胞损伤造成的。如果能直接用健康的细胞把受损的细胞替换掉并继续完成之前的工作,很有可能病就这样轻松治愈了。 事实上,说起来容易做起来难,不过科学家们还是在寻找一种方法,能把一种健康的细胞重新编程,转变成为患者需要的那种细胞,用于替换受损细胞。 这一过程被称作直接重编程(direct reprogramming),让“重塑 …

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美国专家公布有关寿命的9个新发现:久坐不动最减寿

责任心强,更长寿。 一项长达8年的研究显示,各种性格特征中,责任心最有助长寿。斯坦福大学研究人员表示,做人谨慎细心、做事耐心有计划,像研究人员那样有点强迫症倾向,都有助长寿。这类人做事自觉,对待婚姻、工作、健康各方面,往往能做出正确的选择,不太会因为抽烟、飙车,不遵医嘱等原因而意外丧生。 饮食定生死。 研究人员发现,地中海饮食是有助长寿的饮食方式,即多吃果蔬 …

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免疫球蛋白G ( IgG) 片段的水解(四)

基本方案4   胃蛋白酶水解IgG 获取F (ab’)2 片段的大量制备 材料 ≥1mg/ ml 纯化的IgG 适当pH 的乙酸缓冲液 : 0. 2mol/L 乙酸钠,用冰乙酸调至所需pH 2mol/L Tris 碱 PBS, pH8.0 蛋白A 交联琼脂糖凝胶CL-4B 半胱氨酸,可选 碘乙酰胺结晶,可选 聚丙烯酰胺葡聚糖S-200 Super …

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免疫组化的经验总结-常见问题

1、免疫组化实验所用的组织和细胞标本有哪些? 实验所用主要为组织标本和细胞标本两大类,前者包括石蜡切片(病理大片和组织芯片)和冰冻切片,后者包括组织印片、细胞爬片和细胞涂片。其中石蜡切片是制作组织标本最常用、最基本的方法,对于组织形态保存好,且能作连续切片,有利于各种染色对照观察;还能长期存档,供回顾性研究;石蜡切片制作过程对组织内抗原暴露有一定的影响,但可 …

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细胞转染效率影响因素

1.组织培养试剂 优化细胞生长条件。只使用新鲜配制的培养基和添加剂,并经可能减少所用试剂的变更。 基础培养基—目前所使用的各种市售培养基(如,RPMI 1640和DMEM)。培养基的成分包括营养物质(氨基酸,葡萄糖),维生素,无机盐,和缓冲物质。有些成分非常不稳定,因此如果不在使用时新鲜加入就可能会产生问题。务必要使培养基避光保存。因为已知有一些组分和缓冲物 …

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CCAA(engreen)与TIPE1通过下调ERK磷酸化抑制乳腺癌的增殖研究

      乳腺癌是全世界妇女最常见的恶性肿瘤之一。例如,在发达国家,乳腺癌占所有女性癌症的27%。尽管在包括手术、放疗、化疗、内分泌治疗和靶向治疗在内的治疗策略方面取得了进展,乳腺癌患者的预后仍然很差。迄今为止,已经证明许多分子,如BRCA1(乳腺癌易感基因1)、HER2(人表皮生长因子受体2)和p53参与了乳腺癌的发生和发展。然而,乳腺癌的潜在机制,尤其 …

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动物体内转染实验的可靠性如何?

      运用体内转染试剂Entranster进行动物体内实验时,实验的重复性或可靠性和整体的实验分不开,如果基础实验(比如细胞实验)充分,而且又有其他的方法进行印证,那么实验的可靠性就很高,这时动物体内转染就不需要太多动物,几十只动物,能说明问题就可以。但如果其他的实验较少,单纯用一种方法进行实验,就需要排除实验过程的客观因素的影响,比如动物本身的差异, …

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DNA转染效率影响因素

1,  质粒的大小和质量 线性化还是超螺旋会影响转染结果:超螺旋质粒的转染效率比线性DNA高得多,特别是瞬时转染。而线性化DNA转染的整合几率高。质粒太大了转染会困难一些。毕竟,相对致密、较小的外源异物被细胞内吞的几率要大一些。如果你的质粒正好比较大,又没有经验,选择特别注明可以转大质粒的转染试剂成功几率会高一些。有的转染试剂还会提供一些 …

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