2026年 6 月 16日, 星期二
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进行电转染实验时,DNA有什么要求?

        使用高纯度、无菌和无污染的DNA进行电穿孔实验。质粒DNA要求无内毒素,OD值为1.8-2.0。不建议使用微型核酸制备试剂盒准备DNA,因为它可能含有高水平的内毒素。 不要使用仅用乙醇沉淀法纯化的DNA。乙醇沉淀法中残留的盐会引起电流改变并对电穿孔产生负面影响。 建议DNA的浓度范围 …

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脂质体细胞转染试剂的缺点

已有众多的文献报道,脂质体本身会参与细胞生理活动,引起基因表达的上调或下调。如参与PKC(蛋白激酶C)通路调节(Biochemistry.1992 Sep 22;31(37): 9025-30);如抑制ATP酶的活性(Biochim Biophys Acta.2008 Apr;1777(4):362-8);如与线粒体膜发生作用(J Biol Chem. 19 …

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小鼠大脑皮层神经元原代细胞培养步骤

小鼠大脑皮层神经元原代培养步骤: 1、  于无菌条件下切取鼠头并以75%酒精浸泡1min,解剖出完整鼠脑; 2、  预冷解剖液中分离去除软膜、血管、取大脑皮质漂洗,用眼科剪将皮质反复剪切成碎块; 3、  移入培养皿中,吸除解剖液加入0.25%胰蛋白酶2m1,37℃培养箱中消化30min; 4、&nb …

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RNA转染效率低的原因是什么?

RNA转染效率低,可能的原因: · 转染试剂不适合。建议选择RNA专用转染试剂,如Entranster试剂。 · 转染试剂和RNA的量不够,或者比例不对。优化实验条件,调整试剂和RNA用量,优化二者比例。 · 检测时间有问题。适当调整检测时间。 · RNA质量问题。选择纯度高的RNA。 · 细胞状态不佳。调整细胞状态,调整细胞融合度。

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RNA转染实验效率低是什么原因

RNA转染效率低,可能的原因: 1. 转染试剂不适合。建议选择RNA专用转染试剂,如Entranster。 2. 转染试剂和RNA的量不够,或者比例不对。优化实验条件,调整试剂和RNA用量,优化二者比例。 3.检测时间有问题。适当调整检测时间。 4. RNA质量问题。选择纯度高的RNA。 5. 细胞状态不佳。调整细胞状态,调整细胞融合度。

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western-blot实验的影响因素有哪些?

1. 样品质量。所抽取样品的蛋白含量,蛋白变性是否充分等等,还有,蛋白样品的PH值是否在7~8之间。这会直接影响到样品浓缩的效果。此外,蛋白样品是否降解、目的蛋白是否已抽取充分都会对最终结果的可靠性有影响。 2. 凝胶质量。不连续SDS-PAGE胶对凝胶的要求较高,分离胶的PH值应在8.8左右,而浓缩胶的PH应在6.8左右,最好不要差过0.5个PH单位,因为 …

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如何做好细胞电转染实验?

要想做好细胞的电转染实验,应注意以下几点: 1.   选择合适的电场强度 合适的电场强度对于电转染实验非常重要,电场强度不能过高,过高会增加细胞的死亡率;也不能过低,过低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同细胞系具有不同的最佳场强值,实验前应测定所转染细胞系的最佳电场强度。 2.   选择合适的细胞 用于电转的细胞 …

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