英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
为了做好siRNA转染实验，在转染过程中，需要注意以下几点： 1.纯化siRNA siRNA的浓度和纯度对转染实验非常重要。为得到高纯度的siRNA，推荐用玻璃纤维结合，洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸，小的寡核苷酸，蛋白和盐离子。注意：化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化（即PAGE胶纯化）。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导 …
阅读更多 »ECL发光液使用过程中注意事项
1. 发光液不宜暴露于强光下时间过久，请避光保存，在暗室操作。 2. 为了得到最佳的曝光效果，优化一抗、二抗的稀释比例。 3. 请选择高质量保鲜膜。 4. 对于Enlight发光液，应避免使用NaN3 回收HRP 偶联的抗体，因为NaN3 能抑制HRP 的活性。
阅读更多 »细胞转染效率不可重复怎么办？
转染效率重复性差原因： 细胞融合度不同。保证同样的接种量及同样的时间。 细菌污染。可使用Entranster试剂，培养基可加抗生素，避免细胞污染。 细胞传代次数太高了。可重新复苏一管新的细胞。 血清质量不稳定。用同一批号的血清。
阅读更多 »如何提高病毒感染实验效率？
可使用病毒感染增强剂envirus提高病毒的感染效率，下面以慢病毒为例，说一下实验过程。 1.提前一天细胞铺板 提前一天将细胞种植在24孔板中，以感染时细胞融合度在50%左右为宜(悬浮细胞根据需要调整，不要采用过高的细胞密度)。 2.感染 ⑴将2ul的EnvirusTM-LV用25μl无血清稀释液稀释，充分混匀，制成EnvirusTM-LV稀释液。4℃静置5 …
阅读更多 »电转染实验时，对于方波形式的脉冲条件是什么？
一般来说，方波脉冲的理论起始条件可通过指数衰减参数来确定，即在保持电容不变的情况下，将脉冲长度减半，电压增加约10%。之后的优化可在理论计算的脉冲电压附近以10 V为梯度增减。如果不知道指数衰减脉冲条件，可通过测试电压、电容和脉冲长度范围找到最佳的方波脉冲条件。当使用0.4cm电转杯时 …
阅读更多 »CCK8实验中，设定参比波长的目的是什么？必须设定吗？
不一定要设定。CCK8试剂在参比波长没有吸光度。设定参比波长的目的是为了取出由于样品混浊所带来的吸收。 如需了解更多关于cck8产品的信息，请点击https://www.engreen.com.cn/cck-8-kit
阅读更多 »提高细胞转染实验效率的要点
1.组织培养试剂 优化细胞生长条件。只使用新鲜配制的培养基和添加剂，并经可能减少所用试剂的变更。 基础培养基—目前所使用的各种市售培养基(如，RPMI 1640和DMEM)。培养基的成分包括营养物质(氨基酸，葡萄糖)，维生素，无机盐，和缓冲物质。有些成分非常不稳定，因此如果不在使用时新鲜加入就可能会产生问题。务必要使培养基避光保存。因为已知有一些组分和缓冲物 …
阅读更多 »BHK-21细胞的电转染条件是什么？
使用Entranster-E电转液与指数衰减脉冲电转仪时BHK-21细胞的电转染条件是：对于0.2 cm电转杯，细胞密度为10×10^6 cells/ml，DNA用量为2μg，电转液体积为100μl，电压为150V， 电容为950μF。对于0.4 cm电转杯，细胞密度为10×10^6 cells/ml，DNA用量为5μg，电转液体积为25 …
阅读更多 »质粒DNA转染实验效率影响因素
1， 质粒的大小和质量 线性化还是超螺旋会影响转染结果：超螺旋质粒的转染效率比线性DNA高得多，特别是瞬时转染。而线性化DNA转染的整合几率高。质粒太大了转染会困难一些。毕竟，相对致密、较小的外源异物被细胞内吞的几率要大一些。如果你的质粒正好比较大，又没有经验，选择特别注明可以转大质粒的转染试剂成功几率会高一些。有的转染试剂还会提供一些 …
阅读更多 »哪些物质会影响CCK8的测定？
当有还原性物质存在时会影响CCK8 的测定，例如含有维生素C的Glucose 等 (一般培养基中的量不多，酚红或血清不影响测定)。在有酚红存在的情况下，会增加空白吸收，但不影响测定，扣除空白吸收即可。 如需了解更多关于CCK8产品的信息，请点击https://www.engreen.com.cn/cck-8-kit
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