英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
慢病毒感染后未能实现敲降的原因可能有多种。以下是一些可能的原因及其解释： 慢病毒包装质量问题： 病毒滴度较低，导致感染效率不高，可能无法有效转导目标细胞。 病毒颗粒中没有足够的有效载体，影响敲降效果。 靶向序列设计问题： shRNA或sgRNA设计不合理，没有有效靶向目标基因的序列。 目标序列与基因组其他部位的相似性导致脱靶效应，影响敲降效果。 感染条件不佳 …
阅读更多 »体内转染（Entranster）与DNMT1过表达和废用性骨质疏松研究
废用性骨质疏松（DOP）属于继发性骨质疏松症的一种，是由于骨骼的机械张力刺激减少而引起的局部或全身性骨量减少。可以出现于运动能力受限或功能障碍，也可能发生于创伤或者术后制动。有关DOP的确切机制尚不清楚，尽管表观遗传修饰可能是主要原因。最近，有研究表明DNA甲基转移酶（DNMT）蛋白可将胞嘧啶催化为5-甲基胞嘧啶（5mC），改变DNA的表观遗传状态。现分享一 …
阅读更多 »电转染实验过程影响因素
1 电场参数 电场是电转染的重要因素，细胞在电场的作用下，膜通透性增加或是形成小孔，以完成转染过程。因此电场强度是应该被优化的主要参数。电场强度不能过高，过高会增加细胞的死亡率；也不能过低，过低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。因此，一个适宜的电场强度至关重要。 不同细胞系具有不同的最佳场强值，其确定方法除了实验直接测定比较不同场强下转染率的高低外，还可以 …
阅读更多 »siRNA细胞转染应注意的事项
为了达到高的转染效率，在转染实验过程中，需要注意以下几点： 1.纯化siRNA siRNA的浓度和纯度对转染实验非常重要。为得到高纯度的siRNA，推荐用玻璃纤维结合，洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸，小的寡核苷酸，蛋白和盐离子。注意：化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化（即PAGE胶纯化）。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致 …
阅读更多 »DNA转染与干细胞自我更新和多能性维持的研究
干细胞是一类具有自我更新能力和多向分化潜能的原始细胞，包括胚胎干细胞、成体干细胞和诱导多能干细胞（IPS）。干细胞具有非常重要的理论研究意义和临床应用价值。利用胚胎干细胞建立多种细胞类型的体外分化系统，使人们能够在细胞和分子水平上研究哺乳动物的发育过程；不同发育阶段的细胞可确定胚胎发育和细胞分化的分子机制 …
阅读更多 »ECL发光液（enlight）与巨噬细胞迁移抑制因子和弓形虫病研究
弓形虫是一种细胞内原生动物，属于顶端复合体门。这种寄生虫能感染各种温血哺乳动物，包括人类、牲畜和鸟类。据统计，世界上大约三分之一的人口是血清阳性。这种寄生虫在免疫功能低下的病人身上会引起严重的症状，在感染的孕妇身上也会导致流产。此外，流行病学调查的结果表明，弓形虫病的流行给畜牧业造成了巨大的经济损失。 目前，药物（嘧啶、磺胺嘧啶和螺旋 …
阅读更多 »如果细胞密度低，铺板48h可以转染吗？
如果细胞密度较低，一般来说，细胞在转染前的培养时间是很关键的。48小时的培养时间通常是足够的，但是否适合转染还要考虑几个因素： 1. 细胞的生长状态 细胞在转染时最好处于对数生长期，也就是细胞在活跃分裂和增殖中。若细胞密度过低，可能会处于生长迟缓或衰退状态，这会影响转染效率。 细胞密度太低（<30%）：如果细胞太少，可能会影响转染试剂的吸附和细胞的转染 …
阅读更多 »动物体内转染后，遗传性转能维持多久？
体内转试剂Entranster转染动物时是属于瞬时的转染，对目标基因的改变，一般注射1次，可以维持7天左右。随后，随着转入的核酸的代谢，效应减弱消失。动物是否回复到原有的生理状态，这与目标基因有关系。如果希望长期维持动物的转染状态，可以多次注射。
阅读更多 »siRNA转染与卫星胶质细胞中P2X7受体研究
嘌呤信号能够引起炎症和免疫反应。卫星胶纸细胞（SGCs）中的P2X嘌呤受体7（P2X7）的激活可能是促进炎症和神经性疼痛中一个必不可少的组成部分。长链非编码RNAs（lncRNAs）参与多种生理和病理过程。现分享一篇针对lncRNA BC168687的小干扰RNA（Entranster）对高糖和高游离脂肪酸环境下卫星胶纸细胞P2X7受体表达的影响的文献，以供 …
阅读更多 »如何优化细胞RNA转染实验条件？
可从以下几方面进行优化： 1.纯化RNA 在转染前要确认RNA的大小和纯度。为得到高纯度的RNA，推荐用玻璃纤维结合，洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸，小的寡核苷酸，蛋白和盐离子。注意：化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化（即PAGE胶纯化）。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致RNA实验失败。由于实验环境中RNA酶普遍存在，如 …
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