英格恩技术资料

关于使用嘌呤霉素筛选标记（puromycin resistance marker）的慢病毒（lentivirus）或逆转录病毒（retrovirus）进行病毒滴定（virus titration）的 protocol，确实有不少不同的做法，这是因为不同实验室根据自己的系统和需求进行了优化。但是，有一些权威且广泛应用的标准流程可以作为通用参考，下面是整理的一个 …

慢病毒载体系统和腺病毒载体系统比较 病毒表达系统 慢病毒表达系统（Lentivirus） 腺病毒表达系统（Adenovirus） 病毒基因组 RNA病毒 双链DNA病毒 复制 自主复制 自主复制 是否整合 病毒基因组整合于宿主基因组，长时间、稳定表达外源基因 病毒基因组游离于宿主基因组外，瞬时表达外源基因 感染细胞类型 感染分裂和不分裂细胞，适用于难转染的原 …

       冠状动脉微栓塞（CME）是一种常见的和重要的临床现象，急性冠状综合征（ACS），和那些接受溶栓治疗、经皮冠状动脉介入治疗（PCI）的患者都会出现冠状动脉微栓塞现象。现分享一篇运用体内转染（Entranster-in vivo）方法研究细胞死亡因子4/NF-κB在猪冠状动脉微栓塞引起的心脏功能障碍中的发生机制的文献，以供参考。

外伤性脊髓损伤（T-SCI）是世界范围内常见的一种损伤，常导致严重的神经功能缺损和渐进性退化。T-SCI的病理是原发性损伤和继发性损伤的结果。原发性损伤指的是直接导致脊髓结构损伤，包括细胞死亡、局部轴索损伤、血管破裂以及损伤部位周围的局灶性出血。继发性损伤是由原发性损伤引起的各种分子、细胞和生化反应引起的损伤。现分享一篇体内转染（Entranster）与大鼠 …

      胰岛素抵抗与低度炎症状态密切相关，其特征是胰岛素在骨骼肌和脂肪组织中的葡萄糖吸收和肝葡萄糖生成方面的功能受损。幽门螺杆菌已感染世界50%以上的人口，其感染与全身慢性炎症密切相关。胃是幽门螺杆菌感染的主要部位，可引起胃炎、胃溃疡甚至胃癌。然而，幽门螺杆菌感染在周围组织中的作用尚不清楚。流行病学研究表明，幽门螺杆菌感染患者血糖调节受损，2型糖尿病（t …

siRNA转染效率不理想，常见的原因有： 1. RNA与转染试剂比例不佳 由于RNA序列差异、合成条件不同以及是否带有荧光等标记，决定了RNA和转染试剂在不同情况下会有不同的最佳条件，建议先进行预实验优化。 2. 细胞密度不佳 调整细胞密度到转染时汇合度为20-40%。成功转染siRNA的细胞会产生目标基因表达下调，但未成功转染的细胞却不受影响，这时转染效率 …

目的基因不能直接整合到大多数真核细胞，常用的手段是将目的基因包装成病毒来感染细胞，从而得到表达满足实验需求。病毒有很多种，常见的有慢病毒和腺病毒。关于慢病毒和腺病毒的原理以及特别前面的文章中都有介绍过，可以搜索关键字查看。今天主要介绍病毒感染细胞的实验流程。 1.构建目的基因到载体 构建手段 一般是根据原始质粒信息确定克隆方案，有以下两种手段。 1）如果原始 …

1.用于慢病毒感染的细胞接种量是多少？ 根据细胞增殖的速度调整细胞接种量，以保证在感染后4天左右细胞刚好快长满培养皿底部为宜。 针对大部分细胞系：传代周期在2-3天，感染时细胞铺板的密度保持在20-30%左右，则72h后细胞增殖后铺板密度约在90%左右； 针对某些原代细胞： 由于细胞增长缓慢，可以在接种时提高汇合度到50%～60%，但要确保在感染后4天时细胞 …

使用动物体内转染专用试剂Entranster-in vivo进行动物体内转染实验可以： ● 代替基因敲除动物，实验从数月缩短到3天，成本从数万减少到几千。 ● 代替转基因动物，动物数量任意，不用担心动物死亡，可任意重复实验。 ● 代替病毒感染动物，效率更高，可以做包括神经系统内到任意器官，全身器官。 ● 可转任意核酸，基因敲除，转基因动物，病毒感染动物无法进 …

一、试剂 CaCl2 溶液( 2mol/L )、完全培养基、DMEM 培养基、乙醇（或异丙醇） (70% )、胎牛血清( FBS )、HBS 溶液(2X)、HEPES (2.5mmol/L, pH 7.3)、OptiMEM+ 1 ％青霉素／链霉素( P/S )、OptiMEM , 无P/S、pCMVDΔR8.91 质粒、pUMVC 质粒、pVSV- G 质粒 …