我认为,要想做好质粒DNA细胞转染实验,应注意以下几点: 1, 质粒的大小和质量 线性化还是超螺旋会影响转染结果:超螺旋质粒的转染效率比线性DNA高得多,特别是瞬时转染。而线性化DNA转染的整合几率高。质粒太大了转染会困难一些。毕竟,相对致密、较小的外源异物被细胞内吞的几率要大一些。如果你的质粒正好比较大,又没有经验,选择特别注明可以转大质粒的转染试剂成功 …
阅读更多 »体内转染与儿茶酚丁胺影响神经性疼痛机制研究
神经性疼痛(NPP)是许多中枢神经系统损伤或疾病的结果。以往的研究表明,NPP是由p2x4受体介导的,p2x4受体在背根神经节(DRG)的卫星胶质细胞(sgcs)上表达。儿茶酚丁胺(CST)是一种神经内分泌多功能肽,可能参与了NPP的发病机制。现分享一篇体内转染(engreen)与儿茶酚丁胺影响神经性疼痛机制研究的文献,以供参考。 文献地址:ht …
阅读更多 »质粒被酶切过还可以电转吗?
可以,但得分情况来看: 如果质粒是线性化了(即被酶切成线状DNA): 可以电转,但是效率明显低于超级螺旋质粒(超螺旋 plasmid,通常是未切割、天然状态下的质粒结构)。 线性质粒在细胞内容易被核酸酶降解,稳定性和转化成功率比超螺旋质粒低很多。 有些时候,比如做基因组编辑(CRISPR knock-in)、整合型表达载体(需要基因组插入时),反而故意使用线 …
阅读更多 »ECL发光液(enlight)与LncRNA拯救肝损伤并促进肝细胞增殖研究
肝损害对人类健康产生不利影响,在世界范围内发病率很高。它可由多种有毒物质引起的,例如酒精和活性氧。持续性肝损伤可导致大范围肝细胞损害,伴随严重纤维化和不可逆性肝硬化,常导致死亡。影响肝损害的很多因素现在仍不清楚,这阻碍了治疗。因此,更好地了解肝损伤的相关因素对于治疗相关的肝脏疾病至关重要。现分享一篇ECL发 …
阅读更多 »电转感受态细胞的制备
1、 -80℃冰箱保存的菌种在SOB 固体平板上划单菌落; 2、次晨,挑选单克隆感至内含1ml SOB 液体培养基的试管中,37℃,300rpm,6 hr; 3、然后转接到含400ml SOB 液体培养基的2L 摇瓶中(按1:500 的量转接),300rpm,4hr,然后每隔2 min 测一次OD ,至OD =0.76; 4、立刻置冰水浴中骤冷,可以选择在一 …
阅读更多 »能否用384孔板进行CCK8试验?
可以。向各孔中加入培养基体积10%的CCK8 溶液,如果加入的CCK8体积太少,可以先将CCK8溶液稀释1 倍,然后加入培养基体积20%的量。 如需了解更多关于cck8产品的信息,请点击https://www.engreen.com.cn/cck-8-kit
阅读更多 »siRNA转染答疑专题总结(下)
Q9: 刚开始做实验,准备把RNAi的片段转入染色体内稳定表达,不知道是shRNA还是siRNA哪个比较好而且效率比较高?另外,一个载体里同时放两个针对不同基因的shRNA会不会相互影响? A9: 稳定转染当然是shRNA。关于一个载体2个shRNA,涉及到2个shRNA的表达和加工的问题,关键还是2个shRNA都需要顺利表达的问题,这就和你的载体,以及2个 …
阅读更多 »RNA转染(Entranster)与mir-136诱导骨髓细胞分化研究
免疫细胞谱系规范和功能受祖源和环境因素的影响。免疫细胞,如中性粒细胞、单核细胞和髓系抑制因子细胞在炎症环境中分化的机制尚未完全阐明。现分享一篇RNA转染(Entranster)与mir-136诱导骨髓细胞分化研究的文献,以供参考。
阅读更多 »病毒感染细胞实验整体流程
目的基因不能直接整合到大多数真核细胞,常用的手段是将目的基因包装成病毒来感染细胞,从而得到表达满足实验需求。病毒有很多种,常见的有慢病毒和腺病毒。关于慢病毒和腺病毒的原理以及特别前面的文章中都有介绍过,可以搜索关键字查看。今天主要介绍病毒感染细胞的实验流程。 1.构建目的基因到载体 构建手段 一般是根据原始质粒信息确定克隆方案,有以下两种手段。 1)如果原始 …
阅读更多 »体内转染(Entranster)与小鼠基因表达光调控研究
小干扰RNA(siRNA)在基因功能研究和药物开发方面扮演着重要的角色。最近,通过化学修饰作用设计出对光不稳定的siRNA,从时间和空间上来阐明基因额沉默过程。现分享一篇体内转染(Entranster)与小鼠基因表达光调控研究的文献,以供参考。
阅读更多 »
英格恩生物技术博客 生物实验干货分享