在慢病毒感染细胞过程中,会遇到哪些问题呢? 1.在细胞感染时, MOI是一个非常重要的指标,如何确定MOI值呢? MOI:复感染指数,是指病毒对细胞的感染能力,MOI越高,细胞越难被感染。通常把某株细胞有80%被感染时所用的病毒颗粒数和细胞数目的比值作为该株细胞的MOI。 MOI=(病毒滴度×病毒体积)/细胞数目 感染条件及MOI的选择原则: 1. 在细胞形 …
阅读更多 »RNA转染实验的影响因素
1. 转染试剂 转染中要额外注意的就是转染试剂应该是确认无RNase污染的,而且也尽量避免和质粒DNA转染混用——即使试剂本身兼容DNA和RNA转染,因RNA与DNA大小不同,转染条件不同,所需的试剂也应不同,所以RNA专用的转染试剂会更好一些。比如Entranster试剂. 2. &n …
阅读更多 »体内转染(英格恩)与非小细胞肺癌放射敏感性研究
由于环境污染和烟草的持续消费,肺癌已成为男性和女性癌症死亡的最常见原因。肺癌分为两类:小细胞肺癌和非小细胞肺癌。在所有肺癌患者中,非小细胞肺癌占80%-85%。放疗技术已成为70%非小细胞肺癌患者缓解疼痛和梗阻性症状等亚临床疾病的主要治疗方法。与小细胞肺癌相比,非小细胞肺癌对放射治疗的抵抗力更强,逆转这种抵抗力是临床医师目前面临的挑战之一。 现分享 …
阅读更多 »一个抑制脑中风的miRNA
MicroRNAs(miRNAs)是一类非编码小RNA,miRNAs能结合到靶基因mRNA的3’非翻译区诱导转录退化和/或抑制翻译。miRNA在多种病理生理过程中发挥着重要的作用。 Let-7c是最丰富且高度保守的miRNA。以往的研究表明,let-7c通过调节细胞增殖和细胞凋亡抑制癌细胞存活率。最近研究表明Let-7c是巨噬细胞极化的重要调节器。 Let- …
阅读更多 »体内转染(Entranster)与杜鹃花总黄酮对心肌缺血/再灌注损伤保护作用及其机制研究
杜鹃花总黄酮(TFR)是从杜鹃花中提取的有效部分,对家兔和大鼠脑缺血和心肌损伤有明显的保护作用。然而,它们的心肌保护机制尚不清楚。 现分享一篇体内转染(Entranster)与杜鹃花总黄酮对心肌缺血/再灌注损伤保护作用及其机制研究的文献,以供参考。
阅读更多 »siRNA转染实验需要知道的关键点
1.纯化siRNA siRNA的浓度和纯度对转染实验非常重要。为得到高纯度的siRNA,推荐用玻璃纤维结合,洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸,小的寡核苷酸,蛋白和盐离子。注意:化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化(即PAGE胶纯化)。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致siRNA转染实验失败。由于实验环境中RNA酶普遍存在,如皮 …
阅读更多 »体内转染(engreen)与miR-943-3p和过敏性哮喘研究
哮喘是一种和呼吸相关症状有关的慢性气道疾病,如呼气气流受限;预计到2025年,影响哮喘患者总数将达到4亿以上。尽管所有年龄组的哮喘发病率都很高,但老年患者表现出更严重的症状。到目前为止,包括遗传学和环境因素在内的几个因素都参与了哮喘的进展,但哮喘的发病机制在很大程度上还不清楚。过敏性炎症和气道重塑是哮喘的两个基本特征。炎症细胞(主要包括嗜酸性粒 …
阅读更多 »用伯乐电转仪器,电转CHO-K1 , 密度1*10^7次方,方波,0.4口径杯子,300v电压,950毫安电阻率,20ms脉冲,加入20ug质粒,2天后细胞存活率是95%,最后电转染效率只达到30%,问如何提高转染效率?还有个问题,他根据文献资料在电转前,是把杯子和细胞在低温下冰浴,但是说明书说恢复到室温再电转,问是因为这个原因导致效率低吗?
下面把你给的条件先“翻译”成关键参数,方便对症下药: 细胞:CHO-K1,约 1×10^7 cells/mL; 杯子:0.4 cm 间隙; 脉冲:方波,300 V,20 ms,1 次脉冲(相当于 750 V/cm); DNA:20 μg 质粒; 结果:存活率 95%,转染效率 30%; 另外:细胞和电转杯在冰上,未回温到室温就电转。 一、效率偏低的主要可疑点 …
阅读更多 »如何评估体内转染实验的效率?
运用体内试剂Entranster进行体内转染实验后,针对具体的组织器官,不同的注射方法会明显影响效果。比如,大脑神经细胞的体内转染,可以采用尾静脉注射和侧脑室注射,用侧脑室的方法就好得多。再比如,肺部的体内转染,用气管灌注就比用尾静脉注射的方法好得多。体内转染试剂和核酸的混合物与靶器官的接触越直接越充分,效果越好。干扰效率可以理解为干扰的细胞数量和全部细胞的 …
阅读更多 »体内转染(Entranster)与谷胱甘肽过氧化物酶4和继发性脑损伤研究
氧化应激在脑出血(ICH)后继发性脑损伤(SBI)中起重要作用,但其机制尚未完全阐明。近年来,抗氧化酶谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)由于能够降解作为氧化应激主要指标的活性氧(ROS)而备受关注,但GPX4在脑出血中的作用尚未见报道。现分享一篇体内转染(Entranster)与谷胱甘肽过氧化物酶4和继发性脑损伤研究的文献,以供参考。
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