关于细胞的电转染实验,现提出以下几点建议供大家参考: 1. 选择合适的电场强度 合适的电场强度对于电转染实验非常重要,电场强度不能过高,过高会增加细胞的死亡率;也不能过低,过低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同细胞系具有不同的最佳场强值,实验前应测定所转染细胞系的最佳电场强度。 2. 选择合适的细胞 用于 …
阅读更多 »Theranostics | 南方医科大学中西医结合医院:一类新的癌症抑制因子,可以靶向胃癌
《Theranostics》期刊上发表的“CCDC65 as a new potential tumor suppressor induced by metformin inhibits activation of AKT1 via ubiquitination of ENO1 in gastric cancer“文章发现了肿瘤抑制因子 CCDC65 …
阅读更多 »通过转染双链siRNA 在果蝇S2 细胞中进行RNA 干扰
本方案介绍一种通过试剂向果蝇S2 细胞转运siRNA 以触发RNA 干扰的有效方法。本方案适用于24 孔板内培养的细胞。如果使用其他规格的多孔板、培养瓶或者培养皿,需要根据培养孔的表面积换算细胞密度和试剂用量(表1 ) 。 表1 果蝇细胞转染所用细胞, 转染试剂和siRNA (或者ASO) 的体积 培养板或培养皿 24孔 12孔 6孔 6cm 10cm 每孔 …
阅读更多 »是否有嘌呤霉素筛选标记的病毒的病毒滴定protocol,看了好多好多不一样的?这个有比较权威又大众的滴度操作流程吗?
关于使用嘌呤霉素筛选标记(puromycin resistance marker)的慢病毒(lentivirus)或逆转录病毒(retrovirus)进行病毒滴定(virus titration)的 protocol,确实有不少不同的做法,这是因为不同实验室根据自己的系统和需求进行了优化。但是,有一些权威且广泛应用的标准流程可以作为通用参考,下面是整理的一个 …
阅读更多 »RNA转染与Cav3通过Wnt信号通路与骨质疏松大鼠模型骨形成研究
骨质疏松症是一种以骨密度和骨强度降低为特征的疾病,常见于老年人。Caveolin-3(Cav3)是caveolae膜结构域的主要结构蛋白,已被报道可参与细胞信号传导和维持细胞结构。现分享一篇RNA转染(entranster)与Cav3通过Wnt信号通路对骨质疏松大鼠模型骨形成的影响研究的文献,以供参考。 文献地址:https://link.spr …
阅读更多 »如何优化RNA转染条件?
可从以下几方面进行优化: 1.纯化RNA 在转染前要确认RNA的大小和纯度。为得到高纯度的RNA,推荐用玻璃纤维结合,洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸,小的寡核苷酸,蛋白和盐离子。注意:化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化(即PAGE胶纯化)。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致RNA实验失败。由于实验环境中RNA酶普遍存在,如 …
阅读更多 »RNA转染(entranster)与miRNA-183促进黑质神经元凋亡研究
帕金森病是一种常见的神经系统疾病,是典型的纹状体功能障碍模型。它是仅次于阿尔茨海默病的第二常见神经退行性疾病。帕金森病的特征之一是黑质多巴胺能神经元的逐渐丧失。帕金森病患者通常有震颤、僵硬和运动迟缓的症状。遗传因素和环境因素已被纳入帕金森病的病因。对下丘脑核进行高频脑深部刺激是一种流行的外科治疗方法,但不适用于早期的PD,发展中国家的患者也无法获得。现分享一 …
阅读更多 »CCK8实验中,做加药实验时,药物对测定是否有影响?
有时会有影响。如果药物具有还原性,会和CCK8发生显色反应,增加吸光度。解决办法:首先要确认药物是否有吸收,在含有药物的培养基中加入CCK8,测定450 nm 的吸光度,如果它的吸光度比不含药物的培养基 (加CCK8)的吸光度高,则证明药物有影响,可在加CCK8之前更换培养基,去掉药物的影响。 如需了解更多关于cck8产品的信息,请点击http …
阅读更多 »体内转染(Entranster)与TAT和小鼠下丘脑运动及昼夜节律基因表达研究
反式激活子(Transactivator,Tat),HIV-1的调节蛋白,可促进HIV病毒快速复制,在HIV-1感染中起着非常重要的作用。对TAT蛋白功能的研究主要集中在抑制免疫系统、促进血管内皮细胞生长和神经系统损伤方面。迄今为止,很少有研究涉及Tat在昼夜节律中的作用。现分享一篇体内转染(Entranster)与TAT和小鼠下丘脑运动及昼夜节律基因表达研 …
阅读更多 »ECL发光液(Enlight)与大鼠海马体癫痫导致的P-糖蛋白过度表达研究
脑内p-糖蛋白(P-gp)的过度表达是导致耐药性癫痫的重要因素。P-gp抑制剂由于其全身毒性而受到临床应用限制。现分享一篇ECL发光液(Enlight)与大鼠海马体癫痫导致的P-糖蛋白过度表达研究的文献,以供参考。
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英格恩生物技术博客 生物实验干货分享