英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
下面以Entranster-R4000试剂为例，说一下siRNA转染步骤（24孔板） 1.提前1天细胞种植 贴壁细胞：提前一天将细胞种植在24孔板中，以转染时细胞汇合度（Confluence）在30％左右为宜，转染前全培养基总量为0.45ml。 悬浮细胞：采用对数生长期的细胞，数量为常规培养细胞数的1/3进行转染实验。如某细胞常规培养的细胞数是6×105，那 …
阅读更多 »DNA转染与RAB31沉默对骨肉瘤细胞增殖和迁徙影响研究
骨肉瘤（Osteosarcoma，OS）是人类原发性恶性骨肿瘤中最常见的一种类型，具有远距离侵袭和局部侵袭的潜在倾向。OS主要见于青少年儿童，首次发病多为15-19岁。骨肉瘤是一种侵袭性恶性肿瘤，起源于间充质（因而是肉瘤）的原始转化细胞，表现为成骨细胞分化和产生恶性骨样。现分享一篇DNA转染（entranster）与RAB31沉默对骨肉瘤细胞 …
阅读更多 »RNA转染（Entranster）与髓源性抑制细胞的抑制潜能研究
髓系来源的抑制性细胞（MDSC）介导了广泛而深刻的免疫抑制，特别是对T细胞功能的影响。在小鼠中，MDSC的特征是细胞表面分子Gr1(包括巨噬细胞和中性粒细胞标志物Ly6C和Ly6G)和CD11b的表达；在人类中，MDSC通常是CD11b+CD33+HLA-DR2。小鼠CD11b+Gr1+细胞群由两个亚群组 …
阅读更多 »ECL发光液常见问题及解答1
ECL发光灵敏度越高越好吗？ A: 不是。大多数实验的蛋白浓度在pg-ng级别，用增强型的发光液就可以。比如英格恩的Enlight发光液。 2.ECL发光液为什么需要避光保存？ A:因为ECL发光液里的鲁米那等发光成分很容易因为光而失活，所以需要避光保存。 3.ECL发光液多长时间容易失效，用一瓶ECL试剂，结果有差异，是否是失效了？ A：早期的ECL发光也 …
阅读更多 »Cancer Gene Therapy | 郑州大学附属医院：卵巢癌患者或将迎来新的希望
研究团队通过RNA体内转染实验（EntransterTM-in vivo, Engreen）发现沉默MAFG-AS1的表达可以减缓EMT的进程，转移，并且通过抑制NFKB1介导的细胞凋亡可减少卵巢癌细胞IGF1表达。这项成果发表在了《Cancer Gene Therapy》期刊上（“LncRNA MAFG-AS1 promotes the malignant …
阅读更多 »DNA转染实验中的关键点
1）优化条件：质粒不同，所转染的细胞不同及定量的准确性等因素会导致在一些情况下所做的转染不在该优化条件内。这种情况下需要对质粒转染试剂的配比进行优化。另外，可选用更合适的转染试剂，如Entranster试剂。 2）抑制剂：不要在用于制备DNA-转染试剂复合物的培养基中使用抗生素，EDTA，柠檬酸盐，磷酸盐，RPMI，硫酸软骨素，透明质酸，硫酸葡聚糖或其他硫酸 …
阅读更多 »DNA转染试剂对比
由此可见，Entranster-H4000具有更好的转染效果。
阅读更多 »体内转染（engreen）与去甲异波尔定和结肠炎研究
去甲异波尔定（Norisoboldine，NOR）是一种天然的芳香烃受体（AhR）激动剂，已被证明可减轻溃疡性结肠炎（UC）并诱导Treg细胞的产生。在UC状态下，低氧广泛存在于结肠粘膜中，microRNAs（miRs）表达和糖酵解的次级变化有助于Treg分化。现分享一篇体内转染（Entranster）与去甲异波尔定和结肠炎研究的文献，以供参考。
阅读更多 »动物体内转染实验，局部注射，应如何取样观察结果？
运用动物体内转染试剂Entranster-in vivo进行动物体内转染实验时，由于局部注射容易造成药液分布不均，在注射的近端，药液浓度高，效果明细；远端，药液浓度低，效果低一些。所以，一方面，需要尽量将药液均匀覆盖全部靶组织，另一方面，后续实验取样时，在保证实验的情况下，尽量取注射区域附近的组织，不取或者少取药液覆盖差的组织，以增加实验效果。
阅读更多 »siRNA转染实验的关键点
1.纯化siRNA siRNA的浓度和纯度对转染实验非常重要。为得到高纯度的siRNA，推荐用玻璃纤维结合，洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸，小的寡核苷酸，蛋白和盐离子。注意：化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化（即PAGE胶纯化）。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致siRNA转染实验失败。由于实验环境中RNA酶普遍存在，如皮 …
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