英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
这是个很实际的问题。在转染实验中，荧光标记良好说明转染效率高，但如果qPCR在24小时没有观察到预期的基因敲低效果，可能存在以下几种情况： 1. 延长收样时间可能是一个方向 有些siRNA或shRNA介导的敲低效果在48小时甚至72小时后才会明显，因为： mRNA的半衰期可能较长； 敲低并不等于马上降解已有的mRNA； 目标蛋白的表达也可能滞后。 建议： 设 …
阅读更多 »病毒转染原理及步骤
病毒转染原理及步骤 在细胞相关的实验操作中，对于一些按常规方法难以转染甚至无法转染的细胞，通过病毒介导的实验能够大大提高基因的转导效率，以达到目的基因的高效瞬时表达。 病毒转染包括以下步骤：1构建载体 2包装提纯病毒 3感染靶细胞。以慢病毒为例。 慢病毒（Lentivirus）载体是以HIV-1（人类免疫缺陷I型病毒）为基础发展起 …
阅读更多 »体内转染（Entranster）与SIRT3基因和非酒精性脂肪肝病研究
作为一种正在全世界蔓延的慢性复杂性疾病，非酒精性脂肪性肝病（non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD）发病率在全球范围内的攀升迅速，被称为“下一场即将到来的世界性疾病大流行”。NAFLD有发展为肝硬化甚至肝癌的风险，对人类健康造成严重威胁。 Sirtuins是一类NAD＋依赖的去乙酰化酶。SIRT3是该家族 …
阅读更多 »自噬依赖的Axin2+癌干细胞生成促进肝硬化中的肝癌发生
标题：Autophagy-dependent generation of Axin2+ cancer stem-like cells promotes hepatocarcinogenesis in liver cirrhosis 影响因子：（Oncogene，2017年）：7.385（2023年最新IF为8.0，JCR Q1区） 文献概要：自噬是肝硬化的一 …
阅读更多 »动物体内转染实验的可靠性如何？
运用体内转染试剂Entranster进行动物体内实验时，实验的重复性或可靠性和整体的实验分不开，如果基础实验（比如细胞实验）充分，而且又有其他的方法进行印证，那么实验的可靠性就很高，这时动物体内转染就不需要太多动物，几十只动物，能说明问题就可以。但如果其他的实验较少，单纯用一种方法进行实验，就需要排除实验 …
阅读更多 »CCK8试剂盒工作原理是什么？
CCK8基于水溶性四唑盐WST8（化学名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐），WST8在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的脱氢酶还原生成橙黄色的甲臜染料（formazan）。甲臜染料能够溶解在组织培养基中，与活细胞数量成正比。通过比色，可以动态地量化活细胞的数量，从而对细胞增 …
阅读更多 »siRNA细胞转染操作步骤
下面以Entranster-R4000试剂为例，说一下siRNA转染步骤（24孔板） 1.提前1天细胞种植 贴壁细胞：提前一天将细胞种植在24孔板中，以转染时细胞汇合度（Confluence）在30％左右为宜，转染前全培养基总量为0.45ml。 悬浮细胞：采用对数生长期的细胞，数量为常规培养细胞数的1/3进行转染实验。如某细胞常规培养的细胞数是6×105，那 …
阅读更多 »RNA转染（Entranster）与IL-17下调小鼠胶原性关节炎嗅间充质干细胞的免疫抑制能力研究
嗅间充质干细胞（OE-MSCs）是嗅觉固有层中一种新的常驻干细胞类型。OE-MSCs通过调节T细胞的反应，包括调节性T细胞（Treg）的上调和Th1/Th17细胞的下调而发挥其免疫抑制能力。作为炎性细胞因子，IL-17在胶原诱导性关节炎（CIA）的发展过程中起着关键的作用。然而，目前尚不清楚IL-17水平的升高是否会影响OE-MSCs在炎症状态下的免疫抑制功 …
阅读更多 »体内转染（engreen）与猪冠状动脉微栓塞研究
冠状动脉微栓塞（CME）是一种常见的和重要的临床现象，急性冠状综合征（ACS），和那些接受溶栓治疗、经皮冠状动脉介入治疗（PCI）的患者都会出现冠状动脉微栓塞现象。现分享一篇运用体内转染（Entranster-in vivo）方法研究细胞死亡因子4/NF-κB在猪冠状动脉微栓塞引起的心脏功能障碍中的发生机制的文献，以供参考。
阅读更多 »细胞RNA转染实验注意事项
1.纯化RNA 在转染前要确认RNA的大小和纯度。为得到高纯度的RNA，推荐用玻璃纤维结合，洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸，小的寡核苷酸，蛋白和盐离子。注意：化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化（即PAGE胶纯化）。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致RNA实验失败。由于实验环境中RNA酶普遍存在，如皮肤，头发，所有徒手接触过 …
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