细胞生物学

这种情况可能是由多种因素引起的，以下是一些可能的原因： 转录水平和蛋白水平的不同调控机制：虽然shRNA能够有效地降低目标基因的mRNA和蛋白表达，但有时候蛋白质的功能并不完全依赖于其表达量。有可能是基因表达抑制后，细胞通过一些补偿机制（比如其他途径的上调或活化）来恢复其功能，导致表型不一致。 shRNA的特异性和脱靶效应：shRNA可能会靶向与目标基因相似 …

细胞计数是生物学研究和临床实验中常用的技术，用于确定样本中细胞的数量。根据不同的研究需要，细胞计数的方法有很多种。常见的细胞计数方法包括： 1. 显微镜计数法 显微镜计数法是最传统也是最常见的细胞计数方法，通常结合血球计数板（如 Neubauer 血球计数板）进行使用。 步骤： 将细胞悬液稀释到合适浓度。 使用血球计数板，置于显微镜下观察。 根据规则计算视野 …

      对于engreen的Entranster-E电转染试剂，当使用0.4cm比色杯时，大多数细胞类型的指数衰减脉冲条件在200-300V的电压范围和800-1000μF的电容范围内。对于0.2 cm比色杯时，其范围分别为80-160 V和800-1000μF。对于使用0.4 cm比色杯的电穿孔实验，测试电压范围 …

问题1：“感染两天，puro杀3天，5天细胞都长很密” 原因： 细胞分裂快（比如 293T）→ 在5天内即使有筛选，还是会长满。 感染率高 → 很多细胞表达抗性，嘌呤霉素筛选不够“稀释” 建议： 缩短时间：感染 24h 后就加 puromycin，第 2 天开始杀，杀 2–3 天就足够。 更稀释的病毒梯度：推荐加大稀释倍数：1:1000，1:5000，甚至 …

下面以Entranster-R4000试剂为例，说一下siRNA转染步骤（24孔板） 1.提前1天细胞种植 贴壁细胞：提前一天将细胞种植在24孔板中，以转染时细胞汇合度（Confluence）在30％左右为宜，转染前全培养基总量为0.45ml。 悬浮细胞：采用对数生长期的细胞，数量为常规培养细胞数的1/3进行转染实验。如某细胞常规培养的细胞数是6×105，那 …

       已有众多的文献报道，脂质体本身会参与细胞生理活动,引起基因表达的上调或下调。如参与PKC（蛋白激酶C）通路调节(Biochemistry.1992 Sep 22;31(37): 9025-30)；如抑制ATP酶的活性(Biochim Biophys Acta.2008 Apr;1777 …

如果细胞密度较低，一般来说，细胞在转染前的培养时间是很关键的。48小时的培养时间通常是足够的，但是否适合转染还要考虑几个因素： 1. 细胞的生长状态 细胞在转染时最好处于对数生长期，也就是细胞在活跃分裂和增殖中。若细胞密度过低，可能会处于生长迟缓或衰退状态，这会影响转染效率。 细胞密度太低（<30%）：如果细胞太少，可能会影响转染试剂的吸附和细胞的转染 …

你遇到的这个问题在慢病毒（lentivirus）介导的RNA干扰实验中其实挺常见，下面我们逐步分析下可能的原因： 实验现象简述： siRNA转染敲得很有效（蛋白水平明显降低）； **将siRNA序列构建进慢病毒（shRNA形式）**后感染细胞； 荧光表达很强（说明病毒成功进入细胞，且有表达）； 但目标蛋白并未敲低，几乎没有 knockdown 效果。 可能原 …

细胞转染分为瞬时转染和稳定转染。瞬时转染外源核酸不整合到宿主染色体中，在短时间内在基因或蛋白水平产生较高的表达，但通常只持续几天，多用于启动子和其它调控元件的分析。稳定转染是相对需要建立某些基因整合到染色体DNA的细胞系来说的，通常需要通过一些选择性标记，如来氨丙基转移酶（APH；新霉素抗性基因），潮霉素B 磷酸转移酶（HPH），胸苷激酶（TK）等反复筛选， …

PBMC细胞（外周血单个核细胞）可以通过电转染（electroporation）进行基因转染。然而，由于PBMC细胞包括T细胞、B细胞、单核细胞和NK细胞等多种类型，且这些细胞对电转染的敏感性和效率存在差异，电转染PBMC细胞需要特定的优化。 一些关键的注意事项包括： 电转染参数：PBMC电转染的参数（如电压、脉冲时间和次数）需要根据细胞类型进行优化。通常， …