细胞生物学

一般来说，这种慢病毒滴度测定方法不适用于测定AAV（腺相关病毒）的滴度。原因如下： 病毒特性不同：慢病毒和AAV的结构、感染机制不同。慢病毒是逆转录病毒，而AAV是一种非整合的单链DNA病毒，两者的感染和表达方式差异较大。慢病毒的滴度通常通过转染宿主细胞后观察其表达水平来测定，而AAV通常使用其他方法。 检测方法的差异：AAV的滴度检测通常使用qPCR（定量 …

常规转染技术可分为两大类，一类是瞬时转染，一类是稳定转染（永久转染）。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色体中，因此一个宿主细胞中可存在多个拷贝数，产生高水平的表达，但通常只持续几天，多用于启动子和其它调控元件的分析。后者外源DNA 既可以整合到宿主染色体中，也可能作为一种游离体（episome）存在。 转染技术的选择对转染结果影响也很大。磷酸钙转染技术是 …

可以。逆转录病毒（如MLV、lentivirus等）可以共感染同一细胞，尤其是不同病毒包装不同的转基因载体时，可以实现共转导（co-transduction），从而使同一细胞获得多个基因。 但要注意： 病毒滴度足够高：每个病毒的MOI（Multiplicity of Infection）需要合适，才有可能让同一细胞被两种病毒都感染。 标记或选择机制清晰：常用 …

一、细胞冻存 方法： 冻存液最好现配：按1：3：6（或1：2：7） 配冻存液1份DMSO3份血清和6份培养基(养细胞时用什么培养基冻存时就用什么培养基)。取生长状态量好的细胞进行冻存处理， 对于贴壁细胞： 1 吸出旧培养液加PBS冲洗一次 2胰酶消化 3加培养基中止消化，有的细胞是加血清中止 4离心收集细胞，不同细胞离心率不一样（以上仅为贴壁细胞，悬浮细胞收 …

为了达到高的转染效率，在转染实验过程中，需要注意以下几点： 1.纯化siRNA siRNA的浓度和纯度对转染实验非常重要。为得到高纯度的siRNA，推荐用玻璃纤维结合，洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸，小的寡核苷酸，蛋白和盐离子。注意：化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化（即PAGE胶纯化）。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致 …

PCR 法是20 世纪80 年代中期建立起来的一种体外DNA 扩增实验，其基本原理是酶促DNA 合成反应，即在DNA 模板、引物和脱氧核糖核酸存在下，经DNA 聚合酶的作用，使DNA 链扩增延伸。该实验具有灵敏度高、特异性强、检测快速的特点，但其对实验环境要求严格， 实验成本较高， 有时还会出现假阳性的现象。 （一）材料与设备 支原体PCR 检测试剂盒、dN …

大多数细胞系增殖的最适pH 为7. 4, 当培养液逐渐变酸或变碱时，细胞的活力和增殖率将呈下降趋势。培养液必须缓冲细胞代谢葡萄糖和谷氨酰胺所产生的CO2 及乳酸。人们曾一度用碳酸氢盐、HCO3–与空气中CO2 共同构成一个缓冲体系，碳酸氢盐的低pka(pka=6. 1) 在pH7. 4 左右产生微弱的缓冲效能。无毒缓冲剂，如PIPES(pka=6 …

影响细胞转染效率低下的原因主要有： 1、细胞太少或细胞密度太大 细胞密度对转染效率有一定的影响。不同的转染试剂，要求转染时的最适细胞密度各不相同，即使同一种试剂，也会因不同的细胞类型或应用而异。转染时过高或者过低的细胞密度会导致转染效率降低，乃至表达水平偏低。因此如果选用新的细胞系或者新的转染试剂，最好能够进行优化实验并为以后的实验建立一个稳定方法，包括适当 …

G418作为稳定转染通用的一种筛选方式，在进行筛选前应该要注意几点： 1.    G418的浓度：G418是一种氨基糖苷类似物，它通过干扰核糖体功能来阻止哺乳动物细胞蛋白质的合成。因此在筛选过程中G418的浓度将对转染细胞的筛选产生很大的影响。在筛选之前最好进行条件优化确定最佳筛选浓度。尽管文献有报道筛选浓度，最好还是要自己亲自做一下筛选浓度的确定。 2.  …

文章标题 《基于机器学习的氧化磷酸化特征识别在卵巢癌预后、免疫浸润和药物敏感性中的应用》 英文标题：Machine learning-based identification of an oxidative phosphorylation signature for prognosis, immune infiltration, and drug sensi …