细胞生物学

基因重组是由于不同DNA链的断裂和连接而产生DNA片段的交换和重新组合，形成新DNA分子的过程。基因重组的目的是使目的基因的某一细胞中能得到高效表达，即产生人们说需要的高产目的的基因产物，如蛋白质、多肽内生物药物。 基因表达是指结构基因在调控序列的作用下转录成mRNA，经加工后在核糖体的协助下有转译出相应的基因产物——蛋白质，再在受体细胞环境中经修饰而显示出 …

关于细胞的电转染实验，现提出以下几点建议供大家参考： 1.   选择合适的电场强度 合适的电场强度对于电转染实验非常重要，电场强度不能过高，过高会增加细胞的死亡率；也不能过低，过低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同细胞系具有不同的最佳场强值，实验前应测定所转染细胞系的最佳电场强度。 2.   选择合适的细胞 用于 …

下面以Entranster-R4000试剂为例，说一下siRNA转染步骤（24孔板） 1.提前1天细胞种植 贴壁细胞：提前一天将细胞种植在24孔板中，以转染时细胞汇合度（Confluence）在30％左右为宜，转染前全培养基总量为0.45ml。 悬浮细胞：采用对数生长期的细胞，数量为常规培养细胞数的1/3进行转染实验。如某细胞常规培养的细胞数是6×105，那 …

1.从细胞单层吸出培养基。2. 缓慢加入37’C 温浴的PBS 或不含血清的培养基，让培养基沿容器壁流下，注意不要滴在细胞上，以免冲掉附着不牢的细胞。3. 再吸出PBS 或培养基。4. 加入含0.25 ％胰蛋白酶的PBS, 加入蜇以刚刚没过细胞为宜。5. 立即吸去胰蛋白酶，停留在细胞上的时间为10 ~ 30s(可以用不含血清的旧培养基多洗细胞几次 …

试剂 运载 DNA l0mg/mL 细胞生长培养基 电穿孔缓冲液 指数生长的培养细胞 线性化或环状质粒DNA ( 1 ~ 5μg/μL , 溶于无菌去离子水） 磷酸盐缓冲液( PBS ) 胰岛素 设备 电穿孔杯 电穿孔仪器 血细胞计数器 组织培养皿或多孔培养板 组织培养瓶（75cm2） 方法 准备电穿孔用细胞。 对于贴壁细胞 电穿孔前一天，通过胰酶消化释放贴 …

使用Entranster-E电转液与指数衰减脉冲电转仪时Hela细胞的电转染条件是： 对于0.2 cm电转杯，细胞密度为3×10^6 cells/ml，DNA用量为2μg，电转液体积为100μl，电压为130V， 电容为950μF。 对于0.4 cm电转杯，细胞密度为3×10^6 cells/ml，DNA用量为5μg，电转液体积为250μ …

细胞电转染效率不高，有可能是以下原因造成的： 1. 不合适的电场强度 合适的电场强度对于电转染实验非常重要，电场强度不能过高，过高会增加细胞的死亡率；也不能过低，过低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同细胞系具有不同的最佳场强值，实验前应测定所转染细胞系的最佳电场强度。 2. 细胞选择错误 用于电转的细胞一般选取处于对数生长期的细胞（15代以内，传代后2 …

由于心血管系统发病率、病死率高，严重威胁人类生命，随着心血管疾病研究的不断深入，以体外培养的血管平滑肌细胞作为研究模型，在心血管疾病，特别是在动脉粥样硬化研究中的应用越来越广泛。 （一）材料与设备 1. 设备超净工作台、离心机、水浴锅、CO2 培养箱、－70 ℃ 冰箱，－20 °C:冰箱。2. 无菌材料培养皿、止血钳、15ml 离心管、刻度吸管、弯头吸管、T …

是的，藻类细胞和动物细胞电转所用的仪器通常有一些区别。具体来说，电转仪器的选择和设置参数会因细胞类型的不同而有所不同，以下是一些主要的差异： 1. 电转仪器的类型 藻类细胞通常会选择高压短时脉冲电转仪，因为藻类细胞多有细胞壁，且结构较坚硬，需要较高的电压来突破细胞壁，使 DNA 进入细胞。 动物细胞（尤其是哺乳动物细胞）一般选择低压长时脉冲电转仪，因动物细胞 …

可从以下几方面进行优化： 1.纯化RNA 在转染前要确认RNA的大小和纯度。为得到高纯度的RNA，推荐用玻璃纤维结合，洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸，小的寡核苷酸，蛋白和盐离子。注意：化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化（即PAGE胶纯化）。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致RNA实验失败。由于实验环境中RNA酶普遍存在，如 …