英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
1. 转染试剂 转染中要额外注意的就是转染试剂应该是确认无RNase污染的，而且也尽量避免和质粒DNA转染混用——即使试剂本身兼容DNA和RNA转染，因RNA与DNA大小不同，转染条件不同，所需的试剂也应不同，所以RNA专用的转染试剂会更好一些。比如Entranster-R4000. 2. RNA转染时RNA的用量 RNA转染的用量必须参考RNA转染试 …
阅读更多 »B27添加剂（engreen）培养大鼠皮层细胞效果图
RNA转染实验效率低的原因
RNA转染效率低，可能的原因： 1. 转染试剂不适合。建议选择RNA专用转染试剂，如Entranster。 2. 转染试剂和RNA的量不够，或者比例不对。优化实验条件，调整试剂和RNA用量，优化二者比例。 3.检测时间有问题。适当调整检测时间。 4. RNA质量问题。选择纯度高的RNA。 5. 细胞状态不佳。调整细胞状态，调整细胞融合度。
阅读更多 »细胞凋亡检测
方法 细胞类型 特点 说明 形态学／细胞旋转 不限 简单，快速，低廉，贮存无限制 略带主观性，但可靠 Hoechst染色 不限 极快，不能贮存 略带主观性，但可靠 吖啶橙／溴化乙锭 不限 极快，不能贮存 凋亡初期可用，略带主观性，但可靠 电子显微术 不限 耗时，昂贵 可靠 FACS/FSC SSC 非贴壁细胞 简单，须即时进行 客观，仅能提示凋亡 FAC …
阅读更多 »使用带有GFP荧光标记的慢病毒感染细胞，想要检测GFP阳性率，通常用什么方法？
如果您使用的是带有GFP荧光标记的慢病毒感染细胞，想要检测GFP阳性率，通常情况下可以通过流式细胞仪来实现，步骤如下： 收集细胞：首先收集感染后的细胞，并用适当的缓冲液进行重悬。 去除死细胞：可以通过加PI（碘化丙啶）或7-AAD等染料来排除死细胞，这样有助于提高检测的准确性。 流式检测：使用流式细胞仪时，选择FITC通道（通常是FL1通道），因为GFP的荧 …
阅读更多 »细胞转染实验影响因素
转染效率受多种因素影响，主要因素有下面几个： 1．转染试剂 不同细胞系转染效率通常不同，但细胞系的选择通常是根据实验的需要，因此在转染实验前应根据实验要求和细胞特性选择适合的转染试剂。每种转染试剂都会提供一些已经成功转染的细胞株列表和文献，通过这些资料可选择最适合实验设计的转染试剂。当然，最适合的是高效、低毒、方便、廉价的转染试剂。 2．细胞状态 一般低的细 …
阅读更多 »逆转录病毒可以共感染吗？
可以。逆转录病毒（如MLV、lentivirus等）可以共感染同一细胞，尤其是不同病毒包装不同的转基因载体时，可以实现共转导（co-transduction），从而使同一细胞获得多个基因。 但要注意： 病毒滴度足够高：每个病毒的MOI（Multiplicity of Infection）需要合适，才有可能让同一细胞被两种病毒都感染。 标记或选择机制清晰：常用 …
阅读更多 »靶向LSD1通过NF2-Hippo-YAP通路抑制黑色素瘤转移
一、文献标题 Targeting lysine-specific demethylase 1 inhibits melanoma metastasis via the Nf2-Hippo-YAP pathway 二、期刊与影响因子 期刊名称：Cell Death & Disease 影响因子：9.6（2023年数据） 出版信息：文章已接收并在线发表， …
阅读更多 »293T分别包装两种病毒，浓缩后混合感染鼠CD8+ T细胞可以吗？
原则上可以，具体要看以下几个条件： 步骤可行性： 分别包装：在293T细胞中分别转染两种构建（比如psPAX2 + pMD2.G + 各自的载体），收集病毒上清； 浓缩：超速离心或PEG浓缩，两种病毒分别处理； 混合感染：感染前混合两种浓缩后的病毒，用于感染小鼠CD8+ T细胞。 技术要点： T细胞激活：CD8+ T细胞对逆转录病毒天然不易感染，通常需要先用 …
阅读更多 »进行2个不同基因的siRNA共转染，需要加大核酸或者转染试剂的剂量吗？这个和做2个质粒共转染有什么区别？
进行2个不同基因的siRNA共转染时，确实可能需要调整核酸或者转染试剂的剂量，但和质粒共转染的情况有一些区别。 转染试剂的剂量： 当你进行siRNA共转染时，转染试剂的剂量通常依赖于转染效率。对于siRNA来说，一般情况下转染试剂的量不需要比单一siRNA转染时增加太多，因为转染试剂的作用主要是包裹和传递siRNA到细胞内，只要达到足够的转染效率就可以。如果 …
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