细胞生物学

细胞培养的质量好坏是细胞相关实验的基石，许多朋友都曾经历过因为细胞污染影响实验进度的郁闷，被老板批评是小事，要是影响到正常毕业就是大事了。怎么分辨细胞污染，是不是细胞污染？是那种细胞污染？细胞污染后如何处理？ 预防污染 细胞培养是个细致活儿，一不小心就会造成污染，最好养成良好无菌操作习惯。个人经验是，进实验室之前最好洗手，很多实验者都不bother，这是国人 …

下面以Entranster-R4000试剂为例，说一下shRNA转染步骤（24孔板） 1.提前1天细胞种植 贴壁细胞：提前一天将细胞种植在24孔板中，以转染时细胞汇合度（Confluence）在30％左右为宜，转染前全培养基总量为0.45ml。 悬浮细胞：采用对数生长期的细胞，数量为常规培养细胞数的1/3进行转染实验。如某细胞常规培养的细胞数是6×105，那 …

标题 The accumulation of miR-125b-5p is indispensable for efficient erythroblast enucleation 影响因子 该论文发表在《Cell Death and Disease》期刊上，2022年的影响因子为9.0，属于细胞生物学和医学领域的权威期刊。 文献概要 该研究探讨了miR-1 …

问题1：“感染两天，puro杀3天，5天细胞都长很密” 原因： 细胞分裂快（比如 293T）→ 在5天内即使有筛选，还是会长满。 感染率高 → 很多细胞表达抗性，嘌呤霉素筛选不够“稀释” 建议： 缩短时间：感染 24h 后就加 puromycin，第 2 天开始杀，杀 2–3 天就足够。 更稀释的病毒梯度：推荐加大稀释倍数：1:1000，1:5000，甚至 …

G418作为稳定转染通用的一种筛选方式，在进行筛选前应该要注意几点： 1.    G418的浓度：G418是一种氨基糖苷类似物，它通过干扰核糖体功能来阻止哺乳动物细胞蛋白质的合成。因此在筛选过程中G418的浓度将对转染细胞的筛选产生很大的影响。在筛选之前最好进行条件优化确定最佳筛选浓度。尽管文献有报道筛选浓度，最好还是要自己亲自做一下筛选浓度的确定。 2.  …

一、细胞培养所需的培养液 在细胞的研究和利用过程中，最主要的是要为细胞提供最适的生长条件，保持细胞培养开始时的群体状态。这就要求培养条件始终如一，近乎呆板地坚守细节和常规，而且细胞培养，试剂昂贵，费时、费力，不是随随便便就可以进行的。 细胞只有在最适生长条件下，才会保持正常的核型及功能。如果培养条件上打折扣，就意味着会出现带有染色体重排或突变变异株细胞。某些 …

一般原则： 1.转染试剂对细胞有毒性。因此通常会建议在 4–6小时后更换新鲜培养基，以减轻毒性，保证细胞状态。 2.换液是否影响转染效率？ 针对你要拍荧光观察转染效率的情况： 如果只是想观察转染效率，一般建议 不要太早换液，至少等到荧光信号开始显现（通常24–48小时）再拍照。 如果细胞状态不好（明显发黄、漂浮、死亡增加），建议在 4–6小时换液，以保证细胞 …

       已有众多的文献报道，脂质体本身会参与细胞生理活动,引起基因表达的上调或下调。如参与PKC（蛋白激酶C）通路调节(Biochemistry.1992 Sep 22;31(37): 9025-30)；如抑制ATP酶的活性(Biochim Biophys Acta.2008 Apr;1777 …

一般来说，这种慢病毒滴度测定方法不适用于测定AAV（腺相关病毒）的滴度。原因如下： 病毒特性不同：慢病毒和AAV的结构、感染机制不同。慢病毒是逆转录病毒，而AAV是一种非整合的单链DNA病毒，两者的感染和表达方式差异较大。慢病毒的滴度通常通过转染宿主细胞后观察其表达水平来测定，而AAV通常使用其他方法。 检测方法的差异：AAV的滴度检测通常使用qPCR（定量 …