细胞培养

悬浮细胞的分瓶 轻轻的摇匀培养瓶中的细胞培养物，吸出1 ml 到微量离心管中。 对细胞进行计数，同时观察细胞状态。 计算出稀释倍数，决定种子液的量。 吸出适量的细胞到新的培养瓶中。 加入适量的37°C 预热的新培养基。 把细胞放入培养箱，并把盖子松开。 继续培养母液培养物，不加入新的培养基。注意每次传代后都要保留原液作为备份，以防传代后的细胞被污染。在培养瓶 …

下述方案描述的是采用胰蛋白酶处理细胞，进行细胞的传代或收集。维持细胞系的方法通常为每周传代一次，在传代的前一天换培养液；但是某些细胞系需要更频繁的传代。每种细胞系应单独传代以免细胞系交叉污染。超净工作台内不能同时放置一个以上细胞系。 吸干培养单层细胞的细胞培养瓶或培养皿中的培养液。 加入0.05％胰蛋白酶工作液(T-25 细胞培养瓶加入1ml; T-75 细 …

MTT法又称MTT比色法，是一种检测细胞存活的方法。MTT，即四氮唑化合物，能与活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶发生反应而将淡黄色的MTT还原为不溶于水的蓝紫色结晶物甲瓒而沉积在目的细胞中。在一定的细胞数范围内，甲瓒的形成量与细胞数成线性关系。用DMSO将细胞中沉积的蓝紫色甲瓒溶解后，在多功能酶标仪上检测其相应的吸光值，计算细胞浓度。 需注意的是，MTT只能与活 …

（一）无菌操作 细胞在体外生长，其生存环境发生了很大变化。首先，体外培养细胞缺乏抗感染能力，故应无菌操作，以最大限度地防止微生物污染。培养所用的一切物品、液体均应无菌。操作前最好先列出所需用品，培养液等须37°C预热或室温平衡，所有物品准备好后再开始操作， 避免往返拿取用品。 （二）细胞培养操作区域消毒 无菌间或超净台的操作区域使用前后需经紫外灯照射20-3 …

小鼠胚胎成纤维细胞(MEF) 作为原代培养细胞，其刺激增殖的能力强且可靠、易培养、来源丰富，常被用作干细胞培养的饲养层。一方面提供刺激干细胞增殖的各种因子，另一方面保持干细胞的未分化状态。虽然MEF 传代次数有限，但可早期冻存一些，不断复苏，保持长期使用。MEF 的缺点是无法耐受G418 的筛选。替代方法是从持续表达neo 抗性的小鼠品系或转基因品系来分离培 …

培养细胞一经污染，多数较难处理。如果污染细胞价值不大，宜弃之；在寻找原因后彻底消毒操作室，复苏或重新购置细胞，再培养。 若污染细胞价值较大，又难于重新得到，可采取以下办法清除。 一、细菌和真菌的清除 　　1、使用抗生素 　　抗生素对杀灭细菌较有效。联合用药比单独用药效果好。预防用药比污染后再用药效果好。预防用药一般用双抗生素，污染后清除用药需采用大于常用量5 …