细胞培养

1.从细胞单层吸出培养基。2. 缓慢加入37’C 温浴的PBS 或不含血清的培养基，让培养基沿容器壁流下，注意不要滴在细胞上，以免冲掉附着不牢的细胞。3. 再吸出PBS 或培养基。4. 加入含0.25 ％胰蛋白酶的PBS, 加入蜇以刚刚没过细胞为宜。5. 立即吸去胰蛋白酶，停留在细胞上的时间为10 ~ 30s(可以用不含血清的旧培养基多洗细胞几次 …

一、细胞培养所需的培养液 在细胞的研究和利用过程中，最主要的是要为细胞提供最适的生长条件，保持细胞培养开始时的群体状态。这就要求培养条件始终如一，近乎呆板地坚守细节和常规，而且细胞培养，试剂昂贵，费时、费力，不是随随便便就可以进行的。 细胞只有在最适生长条件下，才会保持正常的核型及功能。如果培养条件上打折扣，就意味着会出现带有染色体重排或突变变异株细胞。某些 …

由于不同人种、不同民族的遗传基因不同，所以对不同疾病， 特别是对复杂疾病的易感性、对各种药物的耐受性和对各种环境因子的反应也不同，建立国人肿瘤细胞株， 可为国人疾病的诊断、防治及药物开发提供肿瘤模型。 （一）材料与设备 1. 无菌材料眼科剪，眼科镂， 一次性培养皿，细胞培养瓶T25 、T75 , 冻存管，一次性小滤器， 一次性离心15~50ml， 高糖DME …

此种方法最为可靠且成本低廉， 但培养周期较长。常用于细胞及临床治疗细胞的支原体检查。 （一）材料与设备 1. 精氨酸肉汤培养基   按说明称量粉剂，蒸馆水配制， 高压除菌（加20％胎牛血清）。2. 支原体琼脂培养基   按说明称量粉剂，蒸馆水配制，高压除菌（加20％胎牛血清）。3. 其他   超净工作台、无菌吸管、试管架、培养试管／皿、37°C 培养箱。 （ …

给养  （给予新鲜的培养基） ，细胞生长过程中会消耗培养基中的某些必需因子，必须更换培养基。 分瓶  （传代、细胞数批减少），细胞数量不断增长，超出容器和培养基的负荷。（PS: 培养和传代是同时进行的，很难只进行一个而不进行另一个操作。） 冻存    细胞株都必须分装冻存样品。可以作为备用，防止细胞表型的漂变 …

体外培养细胞的功能表达（分化） 由于体外细胞培养的过程是不断选择具有分裂增殖能力细胞群的过程，所以细胞群一直处于变化中。体外的细胞培养物逐渐会变为处于动态平衡的由多能干细胞、未分化的定向前体细胞和成熟细胞组成的细胞群体，并且，这种平衡可随着环境条件变化而改变。在细胞密度较低的情况下，连续传代可促进细胞增殖、限制细胞分化，而高细胞密度、低血清和合适的激素条件， …

大多数实验室购买的培养基是预先处理好的瓶装液体培养基，或者是干粉状的需要水化和过滤除菌的培养基，后者比较便宜，用量大时更有价值。 由于培养基中都有酚红或其他染料pH 指示剂，虽然外观看上去都差不多，但事实上它们并不一样，所以千万不能用错。 添加有酚红pH指示剂的培养基的颜色 pH6.5 以下为拧檬黄 pH6.5 为黄色 pH7.0 为橙色 pH7.4 为红色 …

一、细胞冻存 方法： 冻存液最好现配：按1：3：6（或1：2：7） 配冻存液1份DMSO3份血清和6份培养基(养细胞时用什么培养基冻存时就用什么培养基)。取生长状态量好的细胞进行冻存处理， 对于贴壁细胞： 1 吸出旧培养液加PBS冲洗一次 2胰酶消化 3加培养基中止消化，有的细胞是加血清中止 4离心收集细胞，不同细胞离心率不一样（以上仅为贴壁细胞，悬浮细胞收 …

下述方案描述的是采用胰蛋白酶处理细胞，进行细胞的传代或收集。维持细胞系的方法通常为每周传代一次，在传代的前一天换培养液；但是某些细胞系需要更频繁的传代。每种细胞系应单独传代以免细胞系交叉污染。超净工作台内不能同时放置一个以上细胞系。 吸干培养单层细胞的细胞培养瓶或培养皿中的培养液。 加入0.05％胰蛋白酶工作液(T-25 细胞培养瓶加入1ml; T-75 细 …

大多数实验室使用抗生素，但是如果无菌操作技术掌握得很好，抗生素其实也不是必需的。多数抗生素在37°C 时的半衰期都很短，培养基内实际的抗生素浓度要比你以为的低。 细胞培养所用的抗生素通常以干粉形式保存，使用前用无菌水或其他溶剂将其溶解，得到的抗生素溶液可以不需要再进行过滤除菌。 细胞培养的两种标准抗生素 庆大霉素，储存液浓度5-10 mg/ml, 工作浓度为 …