2022年 12月 9日, 星期五
新闻

细胞培养

如何选择正确的方法进行细胞的支原体检测?

几种支原体检测方法,各有优缺点。各实验室可根据具体情况,选择不同的方法,或几种方法联合使用。 1. 培养法为最为经济可靠的方法,但其实验周期较长,所以常用来进行对怀疑细胞的最后甄别。 2. 荧光指示细胞法较为快捷,方法简单,但其灵敏度有一定的欠缺, 易造成漏检。 3. PCR 法检测支原体的方法最为快速、灵敏、取样量少,既可做细胞本身,也可做细胞上清的检测, …

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细胞的支原体检测——荧光指示细胞法

常见的支原体检测方法中最简单、最经济的方法是荧光指示细胞法。该方法使用的荧光染料是烟酸己可碱,其激发波长为350nm(紫外激发),发射波长为420nm。该染料会结合到DNA 中富含A-T 的区域,由于支原体的DNA中A-T 含量占多数(55%~80%),所以可被染色而检测到。支原体污染的细胞经染色后,在细胞核外与细胞周围可看到许多大小均一的荧光小点,即为支原 …

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细胞培养类型的分类:根据来源分类

根据来源分类 原代细胞分离于动物或植物的组织,经培养获得。细胞一旦分裂就成为有限传代细胞株,并且有可能变成无性增殖化细胞。把正常细胞来源的有限传代细胞株持续传代,筛选出快速生长的细胞,就有可能把有限传代细胞祩转变成持续传代的细胞株,这个操作就是自然转化。   来源   与组织相溶性 维护 加倍 原代细胞 动物组织、胚胎或成体 典型 难 0 …

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单层细胞的培养

材料 装在冷冻培养瓶中的细胞: BS-C-1  、CV-1  、HuTK- 143B 或BHK-21 细胞 70% (VIV) 乙醇 起始和维持培养基(表1) , 37°C PBS (可选) 胰蛋白酶/EDTA: 0. 25% (m/V) 胰蛋白酶/0. 02% (m/V) EDTA, 37℃ 25 cm2和150 cm2组织培养瓶 湿润的、37°C 、5% …

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转化细胞在软琼脂中的生长

恶性转化的细胞在许多方面不同于其相应的正常细胞,主要不同在于它们失去了接触抑制生长,获得永生性和在动物宿主体中形成肿瘤的能力。软琼脂培养可作为体外检测细胞转化和致瘤性的替代方法。 材料 2% (w/ v) 琼脂 基础营养培养基,如DMEM ,含24. 6 %和20% (v/ v) 胎牛血清 单细胞悬液 12 孔培养板 15ml 聚碳酸酣锥形离心管 ,灭菌 对 …

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细胞污染的常见类型及预防措施

一、支原体污染 识别支原体污染。这是一种很难发现却经常存在的问题。支原体是最小的(0. 3μ.m)能够自我复制的有机体,倒置显微镜下通常观察不到。支原体没有细胞壁,对常用的抗生素不敏感。支原体感染是极为不易察觉的,可能直到出现了可以观察到的病变或发现细胞正常功能丧失的时候,才意识到是发生了支原体感染。 不采用特殊的染色方法,也没有观察到病变但是实验总是不成功 …

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如何制备含血清的培养基?

进行体外哺乳动物的细胞培养,其要点之一是在培养器皿中营造一种生理环境和特殊细胞类型的特异性反应。液态培养基至少要为细胞提供生长所需的营养物质、能量、恒定的pH 和适当的渗透压。此外,培养的外环境,尤其隔水式CO2培养箱,一定要达到稳定的温度和湿度,以防培养液蒸发,还要供给呼吸所需的O2 和维持培养液中碳酸氢盐缓冲系统的CO2 。目前普遍使用的培养基一般由两部 …

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活细胞的显微计数方法及步骤

将细胞样品与台盼蓝染料混合。活细胞排斥染料,而死细胞被染成深蓝色。将细胞铺在血球计数器的玻板上,显微镜下进行人工计数。 一、材料 血(球)计数计(改进的Neubauer 型),每次用后洗净并晾干。(也可以用其他计数器,只是格子不同。) 血(球)计数计的盖玻片(可重复使用),每次用后洗净并晾干。 含0.4% (W/V) 台盼蓝的PBS 。 计数器 悬浮好的细胞 …

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人胚胎肺成纤维细胞的培养

成纤维细胞作为体外最易培养成功的正常细胞,用途广泛。但由于其有限的传代寿命,通常用于细胞衰老的研究,在肿瘤研究中,常常作为正常细胞对照,用于研究细胞恶性转化的条件和影响因素。另外, 它也常用于药物毒性的检测。体外培养的成纤维细胞, 还用于疾病的诊断,如染色体异常疾病的筛选、先天性代谢遗传疾病的细胞化学及生物化学检验和鉴定。 (一)材料与设备 1.设备   超 …

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划痕实验检测肿瘤细胞的运动性

划痕实验是一种简单易行的检测肿瘤细胞运动的方法, 实验成本低, 可以用来检测贴壁生长肿瘤细胞的侵袭转移能力。 (一)材料与设备 6 孔板或者培养皿, 10 μl 或者200μl 无菌的枪头, Marker 笔,直尺。 ( 二)操作步骤 1. 先用Marker 笔在6 孔板背后,用直尺比着,均匀地划横线,每隔0.5-1cm一道,横穿过孔。每孔至少穿过5 条线。 …

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