2024年 6月 16日, 星期日
新闻

细胞培养

细胞的支原体检测——培养法

此种方法最为可靠且成本低廉, 但培养周期较长。常用于细胞及临床治疗细胞的支原体检查。 (一)材料与设备 1. 精氨酸肉汤培养基   按说明称量粉剂,蒸馆水配制, 高压除菌(加20%胎牛血清)。2. 支原体琼脂培养基   按说明称量粉剂,蒸馆水配制,高压除菌(加20%胎牛血清)。3. 其他   超净工作台、无菌吸管、试管架、培养试管/皿、37°C 培养箱。 ( …

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细胞污染的心得体会

细胞培养的质量好坏是细胞相关实验的基石,许多朋友都曾经历过因为细胞污染影响实验进度的郁闷,被老板批评是小事,要是影响到正常毕业就是大事了。怎么分辨细胞污染,是不是细胞污染?是那种细胞污染?细胞污染后如何处理? 预防污染 细胞培养是个细致活儿,一不小心就会造成污染,最好养成良好无菌操作习惯。个人经验是,进实验室之前最好洗手,很多实验者都不bother,这是国人 …

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体外培养细胞的一般性质(五)

体外培养细胞传代规范的建立 细胞从原代培养时开始,就要建立细胞传代常规,即最好依据严格的时间表进行传代等操作,这样可以保持和监控细胞的增殖行为。若到了适合的时间,细胞还没有达到足够高的密度(即细胞没有彼此汇合),那么应增加接种密度:相反,若细胞很快彼此汇合,则应降低接种密度。理想的细胞浓度是使细胞每3~4d 更换培养液,每7d 传代。常规传代使细胞可重复标准 …

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视神经星状胶质细胞的培养

随着细胞培养技术的不断改进,虽然正常细胞难于培养成活,科研人员还是不断研究各种正常细胞的培养方法。到目前为止,几乎体内各种组织细胞均可在体外成功培养。越来越多的研究工作可应用体外培养的正常细胞作为模型开展工作。神经胶质细胞的成功培养最早由Raff 等完成。视神经胶质细胞的培养开始于1990 年,先后有多个实验室培养成功。视神经胶质细胞参与眼部多种疾病的发生、 …

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如何选择正确的方法进行细胞的支原体检测?

几种支原体检测方法,各有优缺点。各实验室可根据具体情况,选择不同的方法,或几种方法联合使用。 1. 培养法为最为经济可靠的方法,但其实验周期较长,所以常用来进行对怀疑细胞的最后甄别。 2. 荧光指示细胞法较为快捷,方法简单,但其灵敏度有一定的欠缺, 易造成漏检。 3. PCR 法检测支原体的方法最为快速、灵敏、取样量少,既可做细胞本身,也可做细胞上清的检测, …

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如何制备HAT 选择培养基?

培养基可用来有意识地从混合细胞群体中筛选特定性质的哺乳动物细胞。 材料 脾细胞与骨髓瘤细胞融合后的杂种细胞(10: 1) 含10 %胎牛血清 的RD 培养基 4X10-5mol/L 氨基喋呤(A 液;用0. 1mol/L NaOH 配制成100 倍浓缩液) 1X10-5mol/L 次黄嘌呤/ 1. 6 X 10-3 mol/L 胸腺嘧啶脱氧核苷,双蒸水配制( …

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细胞冻存的7个注意事项

一、细胞冻存 方法: 冻存液最好现配:按1:3:6(或1:2:7) 配冻存液1份DMSO3份血清和6份培养基(养细胞时用什么培养基冻存时就用什么培养基)。取生长状态量好的细胞进行冻存处理, 对于贴壁细胞: 1 吸出旧培养液加PBS冲洗一次 2胰酶消化 3加培养基中止消化,有的细胞是加血清中止 4离心收集细胞,不同细胞离心率不一样(以上仅为贴壁细胞,悬浮细胞收 …

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改良的Boyden 小室法观察细胞的的运动性

该方法常用来检测白细胞和巨噬细胞的趋化性,后经改良用于肿瘤细胞运动性、侵袭性等的测定。Boyden 小室由上、下两个室组成,两室中间由带微孔的滤膜分隔,也可用鸡胚尿囊膜、人胚胎羊膜等分隔。待测细胞放在上室, 其运动性通过测量滤膜上层到运动最远的细胞之间的距离而确定。也可以计数在滤膜不同平面上细胞数、滤膜底部的细胞数或是另一张在下室的滤膜上细胞数。当上下两室均 …

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单层细胞的培养

材料 装在冷冻培养瓶中的细胞: BS-C-1  、CV-1  、HuTK- 143B 或BHK-21 细胞 70% (VIV) 乙醇 起始和维持培养基(表1) , 37°C PBS (可选) 胰蛋白酶/EDTA: 0. 25% (m/V) 胰蛋白酶/0. 02% (m/V) EDTA, 37℃ 25 cm2和150 cm2组织培养瓶 湿润的、37°C 、5% …

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细胞污染的常见类型及预防措施

一、支原体污染 识别支原体污染。这是一种很难发现却经常存在的问题。支原体是最小的(0. 3μ.m)能够自我复制的有机体,倒置显微镜下通常观察不到。支原体没有细胞壁,对常用的抗生素不敏感。支原体感染是极为不易察觉的,可能直到出现了可以观察到的病变或发现细胞正常功能丧失的时候,才意识到是发生了支原体感染。 不采用特殊的染色方法,也没有观察到病变但是实验总是不成功 …

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