英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
一、细胞培养瓶、培养皿和培养板 目前，细胞培养已很少使用传统的玻璃制品，如玻璃卡氏培养瓶、玻璃离心管、玻璃试剂瓶，而多数使用一次性的塑料制培养瓶、塑料制离心管及塑料制移液管等，而且这些物品的规格也较丰富，如培养瓶T25、T75 、T150、T175 （阿拉伯数字表示培养面积），现在还出现了培养袋、普通培养板（有不同孔径的，如 6 孔、12 孔、24 孔、48 …
阅读更多 »细胞的冷冻和储存
细胞生长时的表型会发生改变或漂变，所以细胞必须计数，计数后应马上冻存。 冷冻细胞前 检查冷冻细胞所需试剂和器具是否备齐。 确认有无菌的可用于冷冻的冻存管 。 确认液氮罐里是否有冻存细胞的位置。 冷冻细胞 将培养基中的细胞培养至对数生长期。 进行活细胞计数，不要冻存死细胞比例高达20％以上的细胞。 决定冻存量，安排需要几个冻存管。 冻存细胞在融化时要稀释10 …
阅读更多 »常用的细胞株
持续传代的细胞株有更高的生长速率、克隆效率、成瘤率和更多的染色体组型。 持续传代细胞株经常被改造成所需的独特表型。 细胞株分化度越高，它的生长也就越慢。 常用的细胞株 细胞株 细胞类型和来源 贴壁或悬浮培养 3T3 成纤维细胞（鼠，胚胎） 贴壁培养 BHK21 成纤维细胞（叙利亚仓鼠，肾脏） 悬浮培养 MDCK 上皮细胞（狗，肾脏） 贴壁培养 ES 胚胎干细 …
阅读更多 »如何判断细胞是否被污染？
发生污染，既耽误时间又是一个灾难，熟练的无菌操作能避免许多问题，但早期检测污染是一种可以预警的方法。对于培养箱中的每瓶细胞都要注意观察，要养成习惯，每次打开培养箱时，迅速看看有没有发生污染。 细菌、酵母、真菌、霉菌、支原体以及其他的培养细胞都可能引起污染。 怎样识别污染 一、肉眼观察，把培养瓶或培养皿拿起来，对着光线检查。 浑浊情况。即使细胞密度很高，培养基 …
阅读更多 »如何制备含血清的培养基？
进行体外哺乳动物的细胞培养，其要点之一是在培养器皿中营造一种生理环境和特殊细胞类型的特异性反应。液态培养基至少要为细胞提供生长所需的营养物质、能量、恒定的pH 和适当的渗透压。此外，培养的外环境，尤其隔水式CO2培养箱，一定要达到稳定的温度和湿度，以防培养液蒸发，还要供给呼吸所需的O2 和维持培养液中碳酸氢盐缓冲系统的CO2 。目前普遍使用的培养基一般由两部 …
阅读更多 »原代细胞的分离培养
原代培养即直接从有机体取下细胞、组织或器官，让它们在体外维持与生长。原代培养的特点是细胞或组织刚离开机体，它们的生物性状尚未发生很大的改变，在一定程度上可反映它们在体内的状态，表现出来源组织或细胞的特性， 因此用于药物实验，尤其是药物对细胞活动、结构、代谢、有无毒性或杀伤作用等，是极好的工具。常用的原代培养法有组织块培养法和消化培养法。 （一）组织块培养法 …
阅读更多 »实验中最常见的英文缩写词汇释义
alkphos 碱性磷酸酶 amp 氨苄青霉素 AMVRT 鸟类粒细胞病毒反转录酶 ANOVA 方差分析 BAC 细菌人工染色体 β-gal β－半乳糖苷酶 Bis N, N’－亚甲双丙烯酰胺 bp 碱基对 BPB 溴酚蓝 BSA 牛血清白蛋白 CAT 氯霉素乙酰转移酶 cDNA 互补DNA cfu 菌落形成单位 CMC 临界微囊浓度 C …
阅读更多 »新生大鼠骨骼肌细胞原代培养及肌管诱导分化
从新生大鼠的骨骼肌中分离成肌细胞（卫星细胞），在体外培养条件下，成肌细胞在培养底物上增殖，在诱导分化条件下，可迁移成直线排列，最终融合形成多细胞肌管。已有报道，将自体的骨骼肌细胞移植入心肌梗死后的瘢痕可改善心肌功能。这些进展激发了科研人员对体外成肌细胞增殖、分化分子机制的基础研究。下面将介绍新生大鼠骨骼肌细胞的原代培养及肌管诱导分化。该方法也可用于小鼠、兔、 …
阅读更多 »改良的Boyden 小室法观察细胞的的运动性
该方法常用来检测白细胞和巨噬细胞的趋化性，后经改良用于肿瘤细胞运动性、侵袭性等的测定。Boyden 小室由上、下两个室组成，两室中间由带微孔的滤膜分隔，也可用鸡胚尿囊膜、人胚胎羊膜等分隔。待测细胞放在上室， 其运动性通过测量滤膜上层到运动最远的细胞之间的距离而确定。也可以计数在滤膜不同平面上细胞数、滤膜底部的细胞数或是另一张在下室的滤膜上细胞数。当上下两室均 …
阅读更多 »细胞的聚集体培养
聚集体培养(aggregate culture) 是指先将肿瘤细胞在旋转摇动培养仪上培养，使肿瘤细胞形成规则的细胞球体结构，然后再将球体进行静止培养，肿瘤细胞可自由从球体向周围移动，观察测量肿瘤细胞向周围移动的情况，记录移出细胞数、细胞移出最远距离等，也可计算肿瘤细胞运动的速度，比较不同肿瘤细胞运动性的差别。 （一）材料与设备 50ml 锥形瓶、旋转摇动培养 …
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