英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
alkphos 碱性磷酸酶 amp 氨苄青霉素 AMVRT 鸟类粒细胞病毒反转录酶 ANOVA 方差分析 BAC 细菌人工染色体 β-gal β－半乳糖苷酶 Bis N, N’－亚甲双丙烯酰胺 bp 碱基对 BPB 溴酚蓝 BSA 牛血清白蛋白 CAT 氯霉素乙酰转移酶 cDNA 互补DNA cfu 菌落形成单位 CMC 临界微囊浓度 C …
阅读更多 »人脐静脉内皮细胞的培养
体外培养的血管内皮细胞已广泛应用于血管疾病、血管修复、肿瘤血管形成等基础研究及临床研究中。体外培养的血管内皮细胞，仍可保持血管内皮细胞的特征，如表达VIII因子、怀布尔－帕拉德小体(Weibel-Palade body ) 、内皮细胞特异性抗原和IV 型胶原等，还可在三维培养体系或特定诱导条件下形成血管样结构。体外培养的血管内皮细胞生长形成单层后，会表现出接 …
阅读更多 »小鼠胚胎成纤维细胞的培养
小鼠胚胎成纤维细胞(MEF) 作为原代培养细胞，其刺激增殖的能力强且可靠、易培养、来源丰富，常被用作干细胞培养的饲养层。一方面提供刺激干细胞增殖的各种因子，另一方面保持干细胞的未分化状态。虽然MEF 传代次数有限，但可早期冻存一些，不断复苏，保持长期使用。MEF 的缺点是无法耐受G418 的筛选。替代方法是从持续表达neo 抗性的小鼠品系或转基因品系来分离培 …
阅读更多 »B27添加剂（engreen）培养大鼠皮层细胞效果图
单层细胞如何用胰蛋白酶处理？
下述方案描述的是采用胰蛋白酶处理细胞，进行细胞的传代或收集。维持细胞系的方法通常为每周传代一次，在传代的前一天换培养液；但是某些细胞系需要更频繁的传代。每种细胞系应单独传代以免细胞系交叉污染。超净工作台内不能同时放置一个以上细胞系。 吸干培养单层细胞的细胞培养瓶或培养皿中的培养液。 加入0.05％胰蛋白酶工作液(T-25 细胞培养瓶加入1ml; T-75 细 …
阅读更多 »悬浮细胞的分瓶操作步骤
悬浮细胞的分瓶 轻轻的摇匀培养瓶中的细胞培养物，吸出1 ml 到微量离心管中。 对细胞进行计数，同时观察细胞状态。 计算出稀释倍数，决定种子液的量。 吸出适量的细胞到新的培养瓶中。 加入适量的37°C 预热的新培养基。 把细胞放入培养箱，并把盖子松开。 继续培养母液培养物，不加入新的培养基。注意每次传代后都要保留原液作为备份，以防传代后的细胞被污染。在培养瓶 …
阅读更多 »如何判断细胞是否被污染？
发生污染，既耽误时间又是一个灾难，熟练的无菌操作能避免许多问题，但早期检测污染是一种可以预警的方法。对于培养箱中的每瓶细胞都要注意观察，要养成习惯，每次打开培养箱时，迅速看看有没有发生污染。 细菌、酵母、真菌、霉菌、支原体以及其他的培养细胞都可能引起污染。 怎样识别污染 一、肉眼观察，把培养瓶或培养皿拿起来，对着光线检查。 浑浊情况。即使细胞密度很高，培养基 …
阅读更多 »细胞在基质凝胶中的培养
基质凝胶培养是研究细胞与细胞、细胞与基质之间相互作用的重要方法，如细胞运动性、肿瘤细胞的侵袭转移能力的研究。现在应用最广泛的凝胶为I 型鼠尾胶原，其他还有纤维蛋白胶原、血浆胶原等。 （一）材料与设备 胶原凝胶I (collagen I) 、完全培养液、培养皿（直径35mm)、吸管、移液枪、CO2 培养箱。 （二）操作步骤 1．用完全培养液调节胶原凝胶的浓度为 …
阅读更多 »细胞的冷冻和储存
细胞生长时的表型会发生改变或漂变，所以细胞必须计数，计数后应马上冻存。 冷冻细胞前 检查冷冻细胞所需试剂和器具是否备齐。 确认有无菌的可用于冷冻的冻存管 。 确认液氮罐里是否有冻存细胞的位置。 冷冻细胞 将培养基中的细胞培养至对数生长期。 进行活细胞计数，不要冻存死细胞比例高达20％以上的细胞。 决定冻存量，安排需要几个冻存管。 冻存细胞在融化时要稀释10 …
阅读更多 »亲和层析纯化抗体,请问纯化后收集到的抗体溶液，加甘油或者醇类，糖类的话，浓度一般是加多少
在亲和层析纯化抗体后，通常需要添加稳定剂以保护抗体免受降解。常见的稳定剂包括甘油、糖类（如蔗糖或海藻糖）、以及醇类（如乙醇）。添加这些稳定剂的目的是增加抗体的稳定性，特别是在长期保存或反复冻融过程中。以下是常用稳定剂的添加浓度建议： 1. 甘油 (Glycerol) 甘油常用于抗体溶液的冷冻保存，以防止冰晶形成和蛋白质变性。推荐添加浓度为： 最终浓度：10- …
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