英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
一、细胞培养所需的培养液 在细胞的研究和利用过程中，最主要的是要为细胞提供最适的生长条件，保持细胞培养开始时的群体状态。这就要求培养条件始终如一，近乎呆板地坚守细节和常规，而且细胞培养，试剂昂贵，费时、费力，不是随随便便就可以进行的。 细胞只有在最适生长条件下，才会保持正常的核型及功能。如果培养条件上打折扣，就意味着会出现带有染色体重排或突变变异株细胞。某些 …
阅读更多 »双质粒表达系统，如何选择启动子?
1. 使用不同的启动子：为两个质粒选择不同类型的启动子，避免它们之间的竞争 这个建议是针对以下情况的： 启动子竞争效应：如果两个质粒使用相同或类似的启动子，尤其是强启动子（例如，CMV启动子），它们可能会争夺有限的转录因子和转录机制资源（如RNA聚合酶）。这种情况下，启动子竞争可能导致一个质粒的表达被抑制，从而影响另一个质粒的表达。 例如，如果两个质粒都使用 …
阅读更多 »细胞复苏的步骤
真核细胞通常悬浮在带有血清和冷冻剂的培养基内，保存在-196°C 的液氮中。如果是商业订购的，通常储存在用干冰包裹的冻存管中。所以冻存后的细胞必须快速解冻后立即培养，以获得最大的生存能力，为了除去冻存时的添加剂， 24 小时后要更换培养基。 一、材料 培养基， 37’C 预热 培养瓶 装有70 ％乙醇的烧杯 1ml 、10ml 的移液管、移液器及 …
阅读更多 »视神经星状胶质细胞的培养
随着细胞培养技术的不断改进，虽然正常细胞难于培养成活，科研人员还是不断研究各种正常细胞的培养方法。到目前为止，几乎体内各种组织细胞均可在体外成功培养。越来越多的研究工作可应用体外培养的正常细胞作为模型开展工作。神经胶质细胞的成功培养最早由Raff 等完成。视神经胶质细胞的培养开始于1990 年，先后有多个实验室培养成功。视神经胶质细胞参与眼部多种疾病的发生、 …
阅读更多 »细胞计数的方法
细胞计数是生物学研究和临床实验中常用的技术，用于确定样本中细胞的数量。根据不同的研究需要，细胞计数的方法有很多种。常见的细胞计数方法包括： 1. 显微镜计数法 显微镜计数法是最传统也是最常见的细胞计数方法，通常结合血球计数板（如 Neubauer 血球计数板）进行使用。 步骤： 将细胞悬液稀释到合适浓度。 使用血球计数板，置于显微镜下观察。 根据规则计算视野 …
阅读更多 »如何分离成纤维细胞？
下述的通用操作方案适用于小鼠、大鼠、仓鼠和鸡胚胎。选择大约一半足孕时间的胚胎最好，10 ~ 13 天龄胚胎含有最大数量的未分化的间质细胞，成纤维细胞可从这些细胞衍生获得。 胚胎的分离 适用哺乳动物（仓鼠、小鼠和大鼠） 采用认可的方案处死啮齿动物 立即在无菌超净台内用70％乙醇擦洗整个动物。若可能，置紫外灯下照射5分钟 用无齿的摄子和剪子在前腿下作一腹部水平切 …
阅读更多 »免疫细胞的制备方法和注意事项
随着免疫细胞生物学和分子生物学的快速发展,免疫治疗已成为肿瘤患者放、化疗和手术后辅助治疗的重要手段之一。 过继免疫治疗(adoptive cellular immunotherapy,ACI)是近年来引起关注的免疫治疗方法。ACI 是通过将具有抗肿瘤活性,能直接或间接介导抗肿瘤效应的免疫细胞注肿瘤宿主体内的一种治疗方法。ACI 应用的免疫细胞主要为 T 细胞 …
阅读更多 »老师，请问我在进行稳转细胞系筛选，密度太高，可以一直用➕抗生素培养基放着等慢慢筛吗？因为有事情两天不在细胞房
回答：不建议简单地“一直用加抗生素的培养基放着等两天”。 这样做的主要风险在于： 细胞密度过高：细胞会因接触抑制而停止生长，但会持续消耗营养并产生大量代谢废物，导致培养基迅速变酸（变黄），细胞健康状态急剧下降，甚至大量死亡。 死亡细胞干扰：凋亡或坏死细胞的DNA和内容物会释放到培养基中，这些物质对周围存活细胞有毒性，会严重影响后续筛选出的细胞系的健康度和筛选 …
阅读更多 »单层细胞的培养
材料 装在冷冻培养瓶中的细胞： BS-C-1 、CV-1 、HuTK- 143B 或BHK-21 细胞 70% (VIV) 乙醇 起始和维持培养基（表1) ， 37°C PBS （可选） 胰蛋白酶／EDTA： 0. 25% (m/V) 胰蛋白酶／0. 02% (m/V) EDTA, 37℃ 25 cm2和150 cm2组织培养瓶 湿润的、37°C 、5% …
阅读更多 »实验中最常见的英文缩写词汇释义
alkphos 碱性磷酸酶 amp 氨苄青霉素 AMVRT 鸟类粒细胞病毒反转录酶 ANOVA 方差分析 BAC 细菌人工染色体 β-gal β－半乳糖苷酶 Bis N, N’－亚甲双丙烯酰胺 bp 碱基对 BPB 溴酚蓝 BSA 牛血清白蛋白 CAT 氯霉素乙酰转移酶 cDNA 互补DNA cfu 菌落形成单位 CMC 临界微囊浓度 C …
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