英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
小鼠大脑皮层神经元原代培养步骤： 1、 于无菌条件下切取鼠头并以75%酒精浸泡1min，解剖出完整鼠脑； 2、 预冷解剖液中分离去除软膜、血管、取大脑皮质漂洗，用眼科剪将皮质反复剪切成碎块； 3、 移入培养皿中，吸除解剖液加入0.25%胰蛋白酶2m1，37℃培养箱中消化30min； 4、&nb …
阅读更多 »关于细胞培养基你需要知道的那些事
大多数实验室购买的培养基是预先处理好的瓶装液体培养基，或者是干粉状的需要水化和过滤除菌的培养基，后者比较便宜，用量大时更有价值。 由于培养基中都有酚红或其他染料pH 指示剂，虽然外观看上去都差不多，但事实上它们并不一样，所以千万不能用错。 添加有酚红pH指示剂的培养基的颜色 pH6.5 以下为拧檬黄 pH6.5 为黄色 pH7.0 为橙色 pH7.4 为红色 …
阅读更多 »肿瘤细胞的原代培养
由于不同人种、不同民族的遗传基因不同，所以对不同疾病， 特别是对复杂疾病的易感性、对各种药物的耐受性和对各种环境因子的反应也不同，建立国人肿瘤细胞株， 可为国人疾病的诊断、防治及药物开发提供肿瘤模型。 （一）材料与设备 1. 无菌材料眼科剪，眼科镂， 一次性培养皿，细胞培养瓶T25 、T75 , 冻存管，一次性小滤器， 一次性离心15~50ml， 高糖DME …
阅读更多 »视神经星状胶质细胞的培养
随着细胞培养技术的不断改进，虽然正常细胞难于培养成活，科研人员还是不断研究各种正常细胞的培养方法。到目前为止，几乎体内各种组织细胞均可在体外成功培养。越来越多的研究工作可应用体外培养的正常细胞作为模型开展工作。神经胶质细胞的成功培养最早由Raff 等完成。视神经胶质细胞的培养开始于1990 年，先后有多个实验室培养成功。视神经胶质细胞参与眼部多种疾病的发生、 …
阅读更多 »人脐静脉内皮细胞的培养
体外培养的血管内皮细胞已广泛应用于血管疾病、血管修复、肿瘤血管形成等基础研究及临床研究中。体外培养的血管内皮细胞，仍可保持血管内皮细胞的特征，如表达VIII因子、怀布尔－帕拉德小体(Weibel-Palade body ) 、内皮细胞特异性抗原和IV 型胶原等，还可在三维培养体系或特定诱导条件下形成血管样结构。体外培养的血管内皮细胞生长形成单层后，会表现出接 …
阅读更多 »实验中最常见的英文缩写词汇释义
alkphos 碱性磷酸酶 amp 氨苄青霉素 AMVRT 鸟类粒细胞病毒反转录酶 ANOVA 方差分析 BAC 细菌人工染色体 β-gal β－半乳糖苷酶 Bis N, N’－亚甲双丙烯酰胺 bp 碱基对 BPB 溴酚蓝 BSA 牛血清白蛋白 CAT 氯霉素乙酰转移酶 cDNA 互补DNA cfu 菌落形成单位 CMC 临界微囊浓度 C …
阅读更多 »悬浮细胞的分瓶操作步骤
悬浮细胞的分瓶 轻轻的摇匀培养瓶中的细胞培养物，吸出1 ml 到微量离心管中。 对细胞进行计数，同时观察细胞状态。 计算出稀释倍数，决定种子液的量。 吸出适量的细胞到新的培养瓶中。 加入适量的37°C 预热的新培养基。 把细胞放入培养箱，并把盖子松开。 继续培养母液培养物，不加入新的培养基。注意每次传代后都要保留原液作为备份，以防传代后的细胞被污染。在培养瓶 …
阅读更多 »实验室小白篇：细胞培养用的液体
一、细胞培养所需的培养液 在细胞的研究和利用过程中，最主要的是要为细胞提供最适的生长条件，保持细胞培养开始时的群体状态。这就要求培养条件始终如一，近乎呆板地坚守细节和常规，而且细胞培养，试剂昂贵，费时、费力，不是随随便便就可以进行的。 细胞只有在最适生长条件下，才会保持正常的核型及功能。如果培养条件上打折扣，就意味着会出现带有染色体重排或突变变异株细胞。某些 …
阅读更多 »原代细胞的分离培养
原代培养即直接从有机体取下细胞、组织或器官，让它们在体外维持与生长。原代培养的特点是细胞或组织刚离开机体，它们的生物性状尚未发生很大的改变，在一定程度上可反映它们在体内的状态，表现出来源组织或细胞的特性， 因此用于药物实验，尤其是药物对细胞活动、结构、代谢、有无毒性或杀伤作用等，是极好的工具。常用的原代培养法有组织块培养法和消化培养法。 （一）组织块培养法 …
阅读更多 »细胞的冷冻和储存
细胞生长时的表型会发生改变或漂变，所以细胞必须计数，计数后应马上冻存。 冷冻细胞前 检查冷冻细胞所需试剂和器具是否备齐。 确认有无菌的可用于冷冻的冻存管 。 确认液氮罐里是否有冻存细胞的位置。 冷冻细胞 将培养基中的细胞培养至对数生长期。 进行活细胞计数，不要冻存死细胞比例高达20％以上的细胞。 决定冻存量，安排需要几个冻存管。 冻存细胞在融化时要稀释10 …
阅读更多 »