2024年 3月 29日, 星期五
新闻

细胞培养

细胞复苏的步骤

真核细胞通常悬浮在带有血清和冷冻剂的培养基内,保存在-196°C 的液氮中。如果是商业订购的,通常储存在用干冰包裹的冻存管中。所以冻存后的细胞必须快速解冻后立即培养,以获得最大的生存能力,为了除去冻存时的添加剂, 24 小时后要更换培养基。 一、材料 培养基, 37’C 预热 培养瓶 装有70 %乙醇的烧杯 1ml 、10ml 的移液管、移液器及 …

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细胞的支原体检测——扫描电子显微镜法

(一)原理 利用电子显微镜的超级放大功能, 直接观察培养细胞中支原体污染情况。 (二)材料与设备 待检测细胞, 0.05%胰蛋白酶/0.02%EDTA 、2.5%的戊二酸、1%饿酸、0.1mol/L磷酸缓冲溶液( pH7.4 ) ,扫描电镜及相关设备。 ( 三)操作步骤 1. 将待检测细胞传代至贴有盖玻片的培养皿中。2. 37°C , CO2 培养箱中培养2 …

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细胞培养类型的分类:根据生长习性分类

根据细胞在液体或半固体培养基中的生长情况分类,生长特征只是功能上的描述,并与细胞来源有关。 悬浮和贴壁生长是细胞的特性和培养条件,有些细胞可以以两种方式进行。   图1 制备分泌抗特定抗原X 的单克隆抗体的杂交瘤细胞筛选培养基中加入了氨甲啋呤抑制剂,可以抑制核昔酸正常生物合成的药物,所以细胞必须采用其他途径合成核酸,而只有杂交瘤细胞株可以采取这种途径合成核昔 …

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如何判断细胞是否被污染?

发生污染,既耽误时间又是一个灾难,熟练的无菌操作能避免许多问题,但早期检测污染是一种可以预警的方法。对于培养箱中的每瓶细胞都要注意观察,要养成习惯,每次打开培养箱时,迅速看看有没有发生污染。 细菌、酵母、真菌、霉菌、支原体以及其他的培养细胞都可能引起污染。 怎样识别污染 一、肉眼观察,把培养瓶或培养皿拿起来,对着光线检查。 浑浊情况。即使细胞密度很高,培养基 …

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体外培养细胞的一般性质(一)

细胞的存活及生长具有贴壁依赖性 绝大多数实体组织来源的细胞,在离开机体、于体外生存生长时,都具有贴壁依赖性,即以单层形式附着在培养瓶或培养皿表面的方式生长。如果无法贴壁(如接种细胞过多、总被摇动等),则细胞将会死亡。从组织中分离出来的细胞或传代后的细胞,首先黏附于培养界面,在界面上铺展,然后才开始分裂、增殖。 细胞的黏附是通过特异的细胞表面受体与细胞外基质分 …

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细胞污染的常见类型及预防措施

一、支原体污染 识别支原体污染。这是一种很难发现却经常存在的问题。支原体是最小的(0. 3μ.m)能够自我复制的有机体,倒置显微镜下通常观察不到。支原体没有细胞壁,对常用的抗生素不敏感。支原体感染是极为不易察觉的,可能直到出现了可以观察到的病变或发现细胞正常功能丧失的时候,才意识到是发生了支原体感染。 不采用特殊的染色方法,也没有观察到病变但是实验总是不成功 …

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实验室小白篇:细胞培养用品及其准备

一、细胞培养瓶、培养皿和培养板 目前,细胞培养已很少使用传统的玻璃制品,如玻璃卡氏培养瓶、玻璃离心管、玻璃试剂瓶,而多数使用一次性的塑料制培养瓶、塑料制离心管及塑料制移液管等,而且这些物品的规格也较丰富,如培养瓶T25、T75 、T150、T175 (阿拉伯数字表示培养面积),现在还出现了培养袋、普通培养板(有不同孔径的,如 6 孔、12 孔、24 孔、48 …

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改良的Boyden 小室法观察细胞的的运动性

该方法常用来检测白细胞和巨噬细胞的趋化性,后经改良用于肿瘤细胞运动性、侵袭性等的测定。Boyden 小室由上、下两个室组成,两室中间由带微孔的滤膜分隔,也可用鸡胚尿囊膜、人胚胎羊膜等分隔。待测细胞放在上室, 其运动性通过测量滤膜上层到运动最远的细胞之间的距离而确定。也可以计数在滤膜不同平面上细胞数、滤膜底部的细胞数或是另一张在下室的滤膜上细胞数。当上下两室均 …

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如何制备血清减量或无血清培养基?

目前,人们普遍认可单一类型细胞的最合乎生理的培养基是添加了蛋白质的、并且含有适当浓度的各种成分以及细胞外基质组分的限定培养基。 材料 基础营养培养基,如DMEM 营养物质:无机盐,氨基酸,维生素 微量元素 添加剂:生长因子和激素,其他各种培养基成分(见表1)  凭经验先选用特别适合某种细胞生长的培养基,减少未限定培养基成分的浓度,直至细胞增殖能力降低,但活力 …

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