细胞培养

在亲和层析纯化抗体后，通常需要添加稳定剂以保护抗体免受降解。常见的稳定剂包括甘油、糖类（如蔗糖或海藻糖）、以及醇类（如乙醇）。添加这些稳定剂的目的是增加抗体的稳定性，特别是在长期保存或反复冻融过程中。以下是常用稳定剂的添加浓度建议： 1. 甘油 (Glycerol) 甘油常用于抗体溶液的冷冻保存，以防止冰晶形成和蛋白质变性。推荐添加浓度为： 最终浓度：10- …

体外培养细胞的能量代谢 体外培养细胞的主要能量来自葡萄糖。大多数培养液含1 g/L (5.55mmol/L)葡萄糖， 近年来含4.5g/L 葡萄糖的高糖培养液（主要是DMEM 和RPMil640 ) 使用得越来越多。这使得细胞增殖更快。葡萄糖主要被细胞用作糖酵解的碳源，以乳酸为终产物。培养细胞中三狻酸循环（也称拧檬酸循环）仍然活跃，氨基酸作为碳源，特别是谷氨 …

小鼠大脑皮层神经元原代培养步骤： 1、  于无菌条件下切取鼠头并以75%酒精浸泡1min，解剖出完整鼠脑； 2、  预冷解剖液中分离去除软膜、血管、取大脑皮质漂洗，用眼科剪将皮质反复剪切成碎块； 3、  移入培养皿中，吸除解剖液加入0.25%胰蛋白酶2m1，37℃培养箱中消化30min； 4、&nb …

一、支原体污染 识别支原体污染。这是一种很难发现却经常存在的问题。支原体是最小的(0. 3μ.m)能够自我复制的有机体，倒置显微镜下通常观察不到。支原体没有细胞壁，对常用的抗生素不敏感。支原体感染是极为不易察觉的，可能直到出现了可以观察到的病变或发现细胞正常功能丧失的时候，才意识到是发生了支原体感染。 不采用特殊的染色方法，也没有观察到病变但是实验总是不成功 …

由于心血管系统发病率、病死率高，严重威胁人类生命，随着心血管疾病研究的不断深入，以体外培养的血管平滑肌细胞作为研究模型，在心血管疾病，特别是在动脉粥样硬化研究中的应用越来越广泛。 （一）材料与设备 1. 设备超净工作台、离心机、水浴锅、CO2 培养箱、－70 ℃ 冰箱，－20 °C:冰箱。2. 无菌材料培养皿、止血钳、15ml 离心管、刻度吸管、弯头吸管、T …

几种支原体检测方法，各有优缺点。各实验室可根据具体情况，选择不同的方法，或几种方法联合使用。 1. 培养法为最为经济可靠的方法，但其实验周期较长，所以常用来进行对怀疑细胞的最后甄别。 2. 荧光指示细胞法较为快捷，方法简单，但其灵敏度有一定的欠缺， 易造成漏检。 3. PCR 法检测支原体的方法最为快速、灵敏、取样量少，既可做细胞本身，也可做细胞上清的检测， …

MTT法又称MTT比色法，是一种检测细胞存活的方法。MTT，即四氮唑化合物，能与活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶发生反应而将淡黄色的MTT还原为不溶于水的蓝紫色结晶物甲瓒而沉积在目的细胞中。在一定的细胞数范围内，甲瓒的形成量与细胞数成线性关系。用DMSO将细胞中沉积的蓝紫色甲瓒溶解后，在多功能酶标仪上检测其相应的吸光值，计算细胞浓度。 需注意的是，MTT只能与活 …

发生污染，既耽误时间又是一个灾难，熟练的无菌操作能避免许多问题，但早期检测污染是一种可以预警的方法。对于培养箱中的每瓶细胞都要注意观察，要养成习惯，每次打开培养箱时，迅速看看有没有发生污染。 细菌、酵母、真菌、霉菌、支原体以及其他的培养细胞都可能引起污染。 怎样识别污染 一、肉眼观察，把培养瓶或培养皿拿起来，对着光线检查。 浑浊情况。即使细胞密度很高，培养基 …

目前，人们普遍认可单一类型细胞的最合乎生理的培养基是添加了蛋白质的、并且含有适当浓度的各种成分以及细胞外基质组分的限定培养基。 材料 基础营养培养基，如DMEM 营养物质：无机盐，氨基酸，维生素 微量元素 添加剂：生长因子和激素，其他各种培养基成分（见表1)  凭经验先选用特别适合某种细胞生长的培养基，减少未限定培养基成分的浓度，直至细胞增殖能力降低，但活力 …