英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
此方案概述了一个快速定量DNA 的方法，并同时分析其物理状态。溴化乙锭染色后，用UV 灯照射透视法可以发现包含＞5ngDNA 的DNA 条带。CCD 照相机拍下未知样品的影像，然后与一系列已知含量标准品进行强度（灰度）对比，从而估计未知样品中DNA的含量。染色凝胶分析是一种快速的同时测量DNA 的数量并分析其物理状态的方式。 SYBR 染料也可用于染色并大致 …
阅读更多 »Western Blot化学发光(ECL)淬灭的原因？
做Western Blot发光实验经常有“淬灭”的情况发生，经常有朋友反映，加发光试剂后立刻可以看到很明显的亮光，可亮光很快就消逝了，压完片后，条带却很弱，甚至什么也没有。这种情况发生的原因是什么？ 要解释这种情况发生的原因，必须先了解ECL化学发光的原理。一般的发光试剂含鲁米诺和H2O2、发光增强剂等物质。发光试剂中的鲁米诺被HRP和H2O2氧化，产生荧光 …
阅读更多 »聚丙烯酰胺凝胶电泳注意事项
聚丙烯酰胺凝胶必须由丙烯酰胺单体、聚合起始物、催化剂以及合适的盐及缓冲液的混合物聚合起来。 丙烯酰胺与BIS (N, N’ – 亚甲双丙烯酰胺）是形成胶基质的单体。 过硫酸铵启动胶的聚合过程。胶的配方要求10% 以水配制的过硫酸铵溶液。大多数资料显示需要现配现用。但是，10 ％溶液可以在4℃放置数周而没有明显的活性丢失。最多配制10 …
阅读更多 »师姐真传的一些引物设计技巧（师姐比师兄靠谱）
实验室小白遇上引物设计，一片迷茫，不知所措。 师姐：现在常用的的引物设计软件有Oligo、PrimerPremier、DNA man等等，还有在线引物设计软件。咱实验室的软件给你拿去。 （师姐比师兄靠谱，真的是手把手的教了，边操作边讲解。） 1. 在NCBI上搜索到该基因，找到该基因的mRNA，在CDS选项中，找到编码区所在位置，在下面的origin中 …
阅读更多 »反转录定量PCR 分析小RNA
Northern 杂交可以揭示小RNA 的表达水平，同时也可揭示小RNA 的长度，并且是小RNA 验证和定量的标准。然而， Northern 杂交不能用来检测低丰度小RNA, 也不能检测大量的小RNA 种类。相比之下，定量RT-PCR 更加敏感并且可以适用于高通量处理（图1) 。 图1 小RNA 定量RT-PCR 分析流程图。 试剂 mirVana miRN …
阅读更多 »western-blot化学发光（ECL）出现高背景的原因是什么？
做Western Blot发光实验经常有“背景太高”问题的出现，要弄清楚“背景太高”的原因，先要知道“背景”是什么，“背景”也是发光，影响发光的因素就会影响背景。 影响发光的因素主要有：1.含HRP的抗体；2.发光试剂；3.和发光试剂反应的杂质，如含杂质的膜。这里面，在很短时间内曝光造成的背景多是由于含HRP的抗体的因素造成的，抗体浓度过高，洗涤不充 …
阅读更多 »慢病毒感染，胶体金测出来很高，可感染效果很差的原因
慢病毒感染效率低，尽管用胶体金测试显示滴度很高，可能有以下几个原因： 病毒颗粒质量：虽然胶体金检测显示病毒滴度很高，但这并不意味着所有的病毒颗粒都是功能性的。有可能病毒颗粒已经失活或者结构受损，无法有效感染目标细胞。 病毒浓度与效价的差异：胶体金检测主要测量病毒颗粒的数量，但这些颗粒不一定都具有感染性。有效感染的病毒颗粒（感染性单位）可能比实际检测的数量要低 …
阅读更多 »siRNA是从牵牛花过表达发现的吗
siRNA（small interfering RNA, 小干扰RNA）并不是从牵牛花的过表达现象中发现的，而是从研究植物基因沉默和RNA干扰现象中逐步发展起来的。siRNA的发现归功于对基因沉默和RNA干扰机制的研究，尤其是科学家在植物、真菌和线虫等生物中对这些现象的观察和研究。 siRNA发现的关键研究 植物基因沉默：在植物中，科学家观察到特定基因可以在 …
阅读更多 »单克隆抗体制备中的免疫接种
材料靶抗原： 表达于细胞的抗原，或蛋白质、多肽生理盐水无血清培养基：仅用于细胞接种弗氏完全佐剂(complete Freunds adjuvant, CFA)实验动物： 无病原体大鼠、小鼠或仓鼠弗氏不完全佐剂(incomplete Freunds adjuvant, IFA)1~2ml玻璃注射器（有Luer-Lok 接头，已消毒）三通管100ml 烧杯20G …
阅读更多 »western-blot化学发光为什么会出现高背景？
做Western Blot发光实验经常有“背景太高”问题的出现，要弄清楚“背景太高”的原因，先要知道“背景”是什么，“背景”也是发光，影响发光的因素就会影响背景。 影响发光的因素主要有：1.含HRP的抗体；2.发光试剂；3.和发光试剂反应的杂质，如含杂质的膜。这里面，在很短时间内曝 …
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