英格恩技术博客 专注转染等实验
主页 / ECL发光实验 / Western Blot化学发光(ECL)背景太高的原因?

Western Blot化学发光(ECL)背景太高的原因?

Western Blot发光实验经常有“背景太高”问题的出现,要弄清“背景太高”的原因,先要知道“背景”是什么,“背景”也是发光,影响发光的因素就会影响背景。

影响发光的因素主要有:1.含HRP的抗体;2.发光试剂;3.和发光试剂反应的杂质,如含杂质的膜。这里面,在很短时间内曝光造成的背景多是由于含HRP的抗体的因素造成的,抗体浓度过高,洗涤不充分,封闭不充分等都可以造成抗体在膜上的非特异结合,制造背景;转移膜包括最后曝光时包裹的塑料薄膜,含有杂质也会制造背景,这种背景较容易发现鉴别。

1

值得注意的是,发光试剂不好,也会制造背景,这在较长时间曝光的情况下明显,有人做过实验,在较长曝光(30分钟以上),优质的发光试剂背景明显较一般的发光试剂背景低,得到的图像也更漂亮,结果也更可靠。

对一些实验来说,如果实验结果本应是多条带,只是一些带由于蛋白量多较强,短时曝光即可检测,而另一些带由于蛋白量相对较少,需要长时间曝光才可检测,这时候主要的影响因素就是发光试剂,因为如果加大抗体的量,普通的发光试剂背景也会相应加大,影响较弱条带的检测,如果减少抗体的量,普通的发光试剂较弱条带不易检测,长时间曝光同样隐藏在背景之中。这时如果不知道还有较弱条带的存在,实验的结论实际上被发光试剂影响了。如果有能长时间曝光而低背景的发光试剂,那么得到的结果就会非常可靠。

所以,较好的抗体和实验过程,再采用优质的发光试剂,就可以减少背景,得到漂亮、真实、可靠的发光结果。

EnlightTM发光液含精准的发光底物,提高信噪比110倍以上,灵敏度更高背景却更低。

扫描二维码,随时阅读沟通。

英格恩技术的微信

Check Also

ECL发光液(Enlight)与小鼠慢性气道炎症研究

哮喘是一种常见的慢性呼吸道炎症 …

发表评论

电子邮件地址不会被公开。 必填项已用*标注

*