英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
小鼠大脑皮层神经元原代培养步骤： 1、 于无菌条件下切取鼠头并以75%酒精浸泡1min，解剖出完整鼠脑； 2、 预冷解剖液中分离去除软膜、血管、取大脑皮质漂洗，用眼科剪将皮质反复剪切成碎块； 3、 移入培养皿中，吸除解剖液加入0.25%胰蛋白酶2m1，37℃培养箱中消化30min； 4、&nb …
阅读更多 »RNA转染与水通道蛋白1和肺动脉平滑肌细胞迁移研究
肝肺综合征（HPS）以肺内血管扩张（IPVD）引起的动脉氧合缺陷为特征。肺血管重塑（PVR）是IPVD的一个重要病理特征，然而，有关该过程的内在机制的细节尚不明确。现分享一篇RNA转染（Entranster）与水通道蛋白1和肺动脉平滑肌细胞迁移研究的文献，以供参考。
阅读更多 »ECL发光液与蛋白激酶Nemo样激酶基因重组腺病毒载体的构建与鉴定研究
Ｎｅｍｏ样激酶（ｎｅｍｏ-ｌｉｋｅｋｉｎａｓｅ，ＮＬＫ）属于丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶。在果蝇、线虫、爪蟾等多种生物中都存在ＮＬＫ的同源蛋白，其结构存在高度的相似性，显示ＮＬＫ在进化过程中十分保守。研究显示，ＮＬＫ能够结合并磷酸化一系列转录因子，参与多个信号通路的调节，其中包括与发育过程密切相关的信号途径Ｗｎｔ和Ｎｏｔｃｈ等。Ｋｏｒｔｅｎｊａｎｎ等研究发现，ＮＬ …
阅读更多 »如何有效提高细胞转染实验效率？
1．选择合适的转染试剂 不同细胞系转染效率通常不同，但细胞系的选择通常是根据实验的需要，因此在转染实验前应根据实验要求和细胞特性选择适合的转染试剂。每种转染试剂都会提供一些已经成功转染的细胞株列表和文献，通过这些资料可选择最适合实验设计的转染试剂。当然，最适合的是高效、低毒的转染试剂。如Entranster …
阅读更多 »如何评估体内转染实验的效率？
运用体内试剂Entranster进行体内转染实验后，针对具体的组织器官，不同的注射方法会明显影响效果。比如，大脑神经细胞的体内转染，可以采用尾静脉注射和侧脑室注射，用侧脑室的方法就好得多。再比如，肺部的体内转染，用气管灌注就比用尾静脉注射的方法好得多。体内转染试剂和核酸的混合物与靶器官的接触越直接越充分，效果越好。干扰效率可以理解为干扰的细胞数量和全部细胞的 …
阅读更多 »ECL发光液与睫状体神经营养因子和阿尔兹海默症治疗研究
通过其病理特征，即老年斑和神经纤维缠结来抑制阿尔茨海默病（AD）进展，是一种有效的治疗方法。许多研究表明睫状体神经营养因子（CNTF）不仅能够促进神经元生长和维持细胞存活，还可显著降低淀粉样蛋白β（Aβ）聚集和沉积。现分享一篇ECL发光液（enlight）与睫状体神经营养因子和阿尔兹海默症治疗研究的文献，以供参考。
阅读更多 »ECL发光液（enlight）与LncRNA拯救肝损伤并促进肝细胞增殖研
肝损害对人类健康产生不利影响，在世界范围内发病率很高。它可由多种有毒物质引起的，例如酒精和活性氧。持续性肝损伤可导致大范围肝细胞损害，伴随严重纤维化和不可逆性肝硬化，常导致死亡。影响肝损害的很多因素现在仍不清楚，这阻碍了治疗。因此，更好地了解肝损伤的相关因素对于治疗相关的肝脏疾病至关重要。现分享一篇ECL发光液（enlight）与LncRNA拯救肝损伤并促进 …
阅读更多 »western-blot实验要点
我做了很久的WB，最大的一个难点感觉在于样品制备上！蛋白的降解有些时候是你想象不到的，可能出奇的糟糕，也可能完全没事~~如果单独做WB的话，感觉以“快速彻底裂解，先变性后保存”的原则比较有效，尽量选择足够强的裂解液，甚至直接给loading buffer裂解，然后取出部分蛋白定量，其余加入loading buffer100度充分变性，再分装保存。有些时候比蛋 …
阅读更多 »siRNA转染效率不理想的原因
siRNA转染效率不理想，常见的原因有： 1. RNA与转染试剂比例不佳 由于RNA序列差异、合成条件不同以及是否带有荧光等标记，决定了RNA和转染试剂在不同情况下会有不同的最佳条件，建议先进行预实验优化。 2. 细胞密度不佳 调整细胞密度到转染时汇合度为20-40%。成功转染siRNA的细胞会产生目标基因表达下调，但未成功转染的细胞却不受影响，这时转染效率 …
阅读更多 »体内转染（Entranster）与去分化软骨瘤进展研究
去分化软骨肉瘤（DDCs）是一种特殊类型的肉瘤，约占传统软骨肉瘤（CCS）的10%～15%。DDCs是一种由两种不同成分组成的肿瘤，一种与低级别CCS相邻的恶性肿瘤，两部分之间有清晰的边界。由于早期转移而对化疗缺乏反应，DDCS预后差，5年生存率仅为10%～24%。因此，迫切需要探索 …
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