脑内出血(Intracerebral hemorrhage,ICH),占中风原因的10% – 15%,是以脑内一条或多条血管破裂和血液进入脑实质为特点。脑出血后血肿导致脑组织受压,导致机械性损伤和继发性脑损伤,以及炎症反应、神经细胞死亡和神经功能缺损。ICH发病率上升,住院率增加18%。大约20 …
阅读更多 »如何解决悬浮细胞转染难题?
悬浮细胞是指细胞生长不依赖支持物表面,在培养液中呈悬浮状态生长,如淋巴细胞。在实验室经常会遇到悬浮细胞的转染,其和贴壁细胞转染还是有很大不同的。 目前大多数实验室用的是脂质体类的转染试剂,脂质体转染是基于电荷吸引原理,先形成脂质体-DNA复合物,散布在细胞周围,然后通过细胞的内吞 …
阅读更多 »siRNA转染后细胞死亡是什么原因?
siRNA转染后细胞死亡,原因也是多样的,如脂质体毒性,转染浓度过高,转染前的细胞状态不佳等都可能导致转染后细胞死亡的情况发生,这种情况下就需要适当优化转染条件;可以选择细胞毒性小的非脂质体类的转染试剂,如Entranster试剂,另外,如果siRNA所靶向的基因对于维持细胞生长是非常重要的,出现细胞死亡的 …
阅读更多 »如何做好DNA转染实验?
我认为,要想做好质粒DNA细胞转染实验,应注意以下几点: 1, 质粒的大小和质量 线性化还是超螺旋会影响转染结果:超螺旋质粒的转染效率比线性DNA高得多,特别是瞬时转染。而线性化DNA转染的整合几率高。质粒太大了转染会困难一些。毕竟,相对致密、较小的外源异物被细胞内吞的几率要大一些。如果你的质粒正好比较大,又没有经验,选择特别注明可以转大质粒的转 …
阅读更多 »如何做好western-blot实验
1. 样品质量。所抽取样品的蛋白含量,蛋白变性是否充分等等,还有,蛋白样品的PH值是否在7~8之间。这会直接影响到样品浓缩的效果。此外,蛋白样品是否降解、目的蛋白是否已抽取充分都会对最终结果的可靠性有影响。 2. 凝胶质量。不连续SDS-PAGE胶对凝胶的 …
阅读更多 »体内转染(Entranster)与小鼠睾丸间质细胞类固醇生成研究
间质细胞对男性生殖发育至关重要。可调控雄激素以及中间激素的分泌。虽然microRNAs(miRNAs)在精子发生过程中起着重要作用,是目前对间质细胞中miRNA对类固醇的调节知之甚少。现分享一篇体内转染(Entranster-in vivo)与小鼠睾丸间质细胞类固醇生成研究的文献,以供参考。
阅读更多 »提高RNA转染效率的几点建议
1.纯化RNA 在转染前要确认RNA的大小和纯度。为得到高纯度的RNA,推荐用玻璃纤维结合,洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸,小的寡核苷酸,蛋白和盐离子。注意:化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化(即PAGE胶纯化)。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致RNA实验失败。由于实验环境中RNA酶普遍存在,如皮肤,头发,所有徒手接触过 …
阅读更多 »ECL发光液(enlight)与LncRNA拯救肝损伤并促进肝细胞增殖研究
肝损害对人类健康产生不利影响,在世界范围内发病率很高。它可由多种有毒物质引起的,例如酒精和活性氧。持续性肝损伤可导致大范围肝细胞损害,伴随严重纤维化和不可逆性肝硬化,常导致死亡。影响肝损害的很多因素现在仍不清楚,这阻碍了治疗。因此,更好地了解肝损伤的相关因素对于治疗相关的肝脏疾病至关重要。现分享一篇ECL发光液(enlight)与LncRNA拯救肝损伤并促进 …
阅读更多 »我的western-blot实验总结
我做了很久的WB,最大的一个难点感觉在于样品制备上!蛋白的降解有些时候是你想象不到的,可能出奇的糟糕,也可能完全没事~~如果单独做WB的话,感觉以“快速彻底裂解,先变性后保存”的原则比较有效,尽量选择足够强的裂解液,甚至直接给loading buffer裂解,然后取出部分蛋白定量,其余加入loading buffer100度充分变性 …
阅读更多 »体内转染(entranster)与冠状动脉微栓塞问题研究
冠状动脉微栓塞(CME)是一种常见的和重要的临床现象,急性冠状综合征(ACS),和那些接受溶栓治疗、经皮冠状动脉介入治疗(PCI)的患者都会出现冠状动脉微栓塞现象。现分享一篇运用体内转染(Entranster)方法研究细胞死亡因子4/NF-κB在猪冠状动脉微栓塞引起的心脏功能障碍中的发生机制的文献,以供参考。
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英格恩生物技术博客 生物实验干货分享