英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
做Western Blot发光实验经常有“背景太高”问题的出现，要弄清“背景太高”的原因，先要知道“背景”是什么，“背景”也是发光，影响发光的因素就会影响背景。 影响发光的因素主要有：1.含HRP的抗体；2.发光试剂；3.和发光试剂反应的杂质，如含杂质的膜。这里面，在很短时间内曝光造成的背景多是由于含HRP的抗体的因素造成的，抗体浓度过高，洗涤不充分，封闭不 …
阅读更多 »Western Blot化学发光(ECL)背景太高的原因？
Western blot实验最常见的10个问题及解决方案
1、Western Blot原理 Westernblot的原理是蛋白质在电力场的作用下，由大到小的进行排列，利用电泳进行分离和富集。拥有抗原表位的蛋白质分子被抗体（一抗）特异性识别并与之结合。在此基础上，酶或荧光标记的二抗识别并结合一抗，通过与底物反应显色来观察目的蛋白。 Westernblot显色的方法主要有以下几种：（1）放射自显影，（2）底物化学发光E …
阅读更多 »细胞转染应该什么时候加抗生素？
细胞转染分为瞬时转染和稳定转染。瞬时转染外源核酸不整合到宿主染色体中，在短时间内在基因或蛋白水平产生较高的表达，但通常只持续几天，多用于启动子和其它调控元件的分析。稳定转染是相对需要建立某些基因整合到染色体DNA的细胞系来说的，通常需要通过一些选择性标记，如来氨丙基转移酶（APH；新霉素抗性基因），潮霉素B 磷酸转移酶（HPH），胸苷激酶（TK）等反复筛选， …
阅读更多 »转染用的质粒，你提对了吗？
老板天天催着要实验进展，是不是很郁闷？可是细胞不给力，是不是很忧郁？刚刚复苏的细胞长的挺好的，可是转染后，细胞状态莫名其妙就变差了，是不是很伤心？转染试剂毒性大，换转染试剂？结果还是一样，是不是很无奈？勉强收了一点点细胞，可是还不够做个western blot的，是不是很抓狂？实验总是不能顺利进行，找不到原因，是不是都要吐血了？没人给指点迷津，是不是心都要碎 …
阅读更多 »SCI：调节心肌梗死的关键基因
心肌梗死是通过心肌细胞死亡诱导心脏衰竭一个重要原因。然而，唾液酸在心肌细胞凋亡中的作用机制尚不清楚。最近，大连医科大学的研究人员在关于心肌梗死的研究中发现，唾液酸转移酶siat7a是心肌梗死的重要影响因素。这项研究结果发表在最近的《Basic Research in Cardiology》杂志，可以帮助揭示心肌梗死治疗的潜在靶标。 心肌梗死（myocardi …
阅读更多 »Plos one 2015：肺癌细胞凋亡的调控——ENTPD5
肺癌是发病率和死亡率增长最快，对人群健康和生命威胁最大的恶性肿瘤之一。近50年来许多国家都报道肺癌的发病率和死亡率均明显增高。 肺癌被认为是一种遗传性疾病，其中异常的内源性致病基因的表达造成基因组不稳定，增强肿瘤细胞的活力和侵袭性。尽管成功治疗原发性恶性肿瘤，仍有在1/4以上的术后患者复发、转移。 ENTPD5是一种内质网酶，水解UDP为UMP，促进蛋白的N …
阅读更多 »体内转染文章背后的故事
节省时间 河北医科大学附属二院的老师在临床实践中发现在多发性硬化症患者样本中有一个miRNA上调的现象。针对该miRNA的mimics很容易得到，怎么导入动物呢？他们想到了用英格恩动物体内转染试剂，将mimics与体内转染试剂混合后，尾静脉注射小鼠，几天后就可以观察结果，进行PCR，病理等研究，结果发现该miRNA的上调影响到一些免疫细胞的改变，从而导致多发 …
阅读更多 »病毒转染原理及步骤
病毒转染原理及步骤 在细胞相关的实验操作中，对于一些按常规方法难以转染甚至无法转染的细胞，通过病毒介导的实验能够大大提高基因的转导效率，以达到目的基因的高效瞬时表达。 病毒转染包括以下步骤：1构建载体 2包装提纯病毒 3感染靶细胞。以慢病毒为例。 慢病毒（Lentivirus）载体是以HIV-1（人类免疫缺陷I型病毒）为基础发展起 …
阅读更多 »siRNA，shRNA，dsRNA，miRNA间的区别
RNA干扰（RNAi），即用20多个核苷 酸组成的短的双链RNA（siRNA）代替传统反义核酸进行转录后基因沉默，已经迅速而广泛地应用到基因功能，基因表达调控机制研究等热门领域，并为基因 治疗开辟了新的途径。近两年来，这方面的科学论文及报道爆炸性增长，几乎每天都有新的结果涌现。这些论文中，出现了很多与RNA干扰相关的概念，意思很相 近但并不完全相同，这里列举 …
阅读更多 »EntransterTM-in vivo体内转染试剂
EntransterTM-in vivo体内转染试剂 产品介绍 EntransterTM-in vivo是英格恩生物公司（Engreen Biosystem Co,Ltd.）最新研发合成的用于动物体内转染的转染试剂。EntransterTM-in vivo动物体内转染试剂可将小片断RNA如siRNA，miRNA，mimic、inhibitor或DNA转染到动 …
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