英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
细胞转染分为瞬时转染和稳定转染。瞬时转染外源核酸不整合到宿主染色体中，在短时间内在基因或蛋白水平产生较高的表达，但通常只持续几天，多用于启动子和其它调控元件的分析。稳定转染是相对需要建立某些基因整合到染色体DNA的细胞系来说的，通常需要通过一些选择性标记，如来氨丙基转移酶（APH；新霉素抗性基因），潮霉素B 磷酸转移酶（HPH），胸苷激酶（TK）等反复筛选， …
阅读更多 »细胞转染应该什么时候加抗生素？
Experimental immunology | 是什么在助长红斑狼疮？
中国西安交通大学医学院在最新的研究中首次表明：lncRNA MIAT 通过体内降解miR-222来上调 CFHR5 表达，增强狼疮疾病的活动，并在《Experimental immunology》期刊上发表了题为 “LncRNA MIAT enhances systemic lupus erythematosus by upregulating …
阅读更多 »动物体内转染需要哪些条件？
1.每次动物实验，需要准备什么东西，器材？ ①转染的核酸，如siRNA，miRNA，mimic、inhibitor，也可以转染DNA。 ②转染试剂和动物。 ③进行注射的器材。 2.可以转染的核酸都有什么？细胞实验的核酸可以用吗？ 可以转染小片断RNA如siRNA，miRNA，mimic、inhibitor，也可以转染DNA。进行体外细胞实验的核酸就可以。但要 …
阅读更多 »Theranostics | 关于1型糖尿病的新发现
复旦大学儿童医院儿科研究所的团队在《Theranostics》上发表了题为“Circular RNA circPPM1F modulates M1 macrophage activation and pancreatic islet inflammation in type 1 diabetesmellitus”的论文。文章阐明了 …
阅读更多 »小鼠尾静脉注射技巧有哪些？
1.小鼠的固定 最好使用小鼠固定器，前部有气孔保证小鼠呼吸，后部可以将尾部拉出，不要让小鼠在固定器中有太多活动空间， 如空间较大，可加入一些填充物，防止小鼠在注射时乱动。 2.尾静脉的准备 可以将小鼠尾部在50℃左右温水浸浴2分钟，以扩张静脉。 3.尾静脉的选择 小鼠尾部有3条尾静脉。背部1天，两侧各1条。由于背部静脉较深，较细，一般选择侧面的2条。 4.注 …
阅读更多 »如何选择稳定转染的筛选抗生素？
稳定转染和瞬时转染，细胞转染的步骤基本相同，只是在转染后的细胞处理会不一样。由于瞬时转染只能维持几天，故在转染12～72后就可以在蛋白或基因水平进行相应的检测了。稳转细胞系通常需要通过一些选择性标记反复筛选，得到稳定转染的同源细胞系。 通常构建的载体上有两个抗性基因，如，氨苄青霉素和新霉素。那么建立稳转细胞系时该用哪种抗生素来筛细胞呢？ 很多真核表达质粒上都 …
阅读更多 »Neuropharmacology | 治疗阿尔兹海默症的新视角
近日，中国药科大学姚文兵教授课题组在《Neuropharmacology》期刊上发表了“MicroRNA-23b attenuates tau pathology andinhibits oxidative stress by targeting GnT-III in Alzheimer’s disease”的研究论文，揭示了MicroRNA-2 …
阅读更多 »成功转染siRNA的主要关键点有什么？
1.设计合成有效的siRNA RNAi的核心需要siRNA对相应mRNA进行有效的结合和作用。siRNA的设计合成首先很重要，最优的设计可以用最小的工作浓度取得满意的沉默效果，减少副反应的发生。siRNA的设计可以通过检索,优先选用经过验证的siRNA或设计多对siRNA。需要强调的是，需要同时设置阴性对照以排除非特异沉默现象和阳性对照以确认整个实验体系的有 …
阅读更多 »磷酸钙-DNA共沉淀法的原理和步骤
前些时间有微友在平台上咨询细胞转染的事项，并对一篇博客文章《为什么磷酸钙转染并不稳定？为什么磷酸钙转染并不经济？》比较感兴趣。在这里，对这位微友的疑惑进行更加全方位的了解，在此将磷酸钙转染的原理和步骤和大家分享，以供交流讨论。 核酸以磷酸钙-DNA 共沉淀物的形式出现时，可使 DNA 附在细胞表面，这有利于细胞吞入摄取核酸，或通过细胞膜脂相收缩时裂开的空隙进 …
阅读更多 »Western Blot化学发光(ECL)背景太高的原因？
做Western Blot发光实验经常有“背景太高”问题的出现，要弄清“背景太高”的原因，先要知道“背景”是什么，“背景”也是发光，影响发光的因素就会影响背景。 影响发光的因素主要有：1.含HRP的抗体；2.发光试剂；3.和发光试剂反应的杂质，如含杂质的膜。这里面，在很短时间内曝光造成的背景多是由于含HRP的抗体的因素造成的，抗体浓度过高，洗涤不充分，封闭不 …
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