英格恩生物技术博客 生物实验干货分享

       siRNA导入细胞有以下几种方法：化学转染技术、电穿孔法、磷酸钙共沉淀技术、显微注射和载体导入技术。选择时应该依据实验条件考虑以下因素：细胞对转入方式的承受能力、细胞对病毒侵染的易感性、细胞的生长特性等。对贴壁细胞来说化学转染技术（Entranster）是最为常用的方法，而对悬浮细胞则采用电穿孔法效果较好 …

       对于难转染的细胞的转染，如何提高转染效率的问题也是目前研究的技术难题。一般建议使用电转的方法，但是由于电转的方法对细胞损伤比较大，该方法也未必是最佳的。推荐Entranster-E电转染试剂，可将电击对细胞的损伤降到最低。转染效率的确定，常用的是流式细胞仪检测的方法。

        血清中含有大量的蛋白质，在转染过程中，带负电的蛋白质可能干扰阳离子脂质体对核酸的吸附，影响转染效率。另外，使用脂质体等转染试剂时，由于含血清转染会将血清中的蛋白带入细胞，引发细胞毒性，导致转染效率降低，故不能有血清转染。这些转染试剂要求在转染前换无血清培养基，转染后4-6h在更换成有 …

运用体内试剂Entranster进行体内转染实验后，针对具体的组织器官，不同的注射方法会明显影响效果。比如，大脑神经细胞的体内转染，可以采用尾静脉注射和侧脑室注射，用侧脑室的方法就好得多。再比如，肺部的体内转染，用气管灌注就比用尾静脉注射的方法好得多。体内转染试剂和核酸的混合物与靶器官的接触越直接越充分，效果越好。干扰效率可以理解为干扰的细胞数量和全部细胞的 …