英格恩生物技术博客 生物实验干货分享

当细胞被裂解，内容物释放时，蛋白水解酶和其他一些降解的酶也一同被释放，这时候需要在裂解的缓冲液中加入蛋白水解酶。PS: 细胞自己的蛋白水解酶也会降解细胞内的蛋白质。 抑制剂 靶向的蛋白酶 有效浓度 储存浓度 其他 抑蛋白酶肽 丝氨酸蛋白水解酶 0.1-2ug/ml 10mg/ml溶解在PBS中 避免反复冻融 EDTA 金属蛋白水解酶 0.5-2mmol/L …

去污剂是蛋白质生命的一部分，用于细胞裂解以及变性蛋白质，但是去污剂会干扰蛋白质水平和蛋白质功能的测定。 要测定含有去污剂的样品中蛋白质的水平，可以有两个选择： 标准曲线的测定中包括相同比例的去污剂。得到一个准确的定量是必须的。去污剂会影响标准曲线的线性读数，你可以稀释样品到线性范围，但是对于低浓度的蛋白质样品这个方法不可行。 用可以带有去污剂的蛋白质测量方法 …

通常用的蛋白质浓度测定方法是Bradford 、BCA 以及在280 nm 处的光吸收。实验室倾向于选择一些特定的方法，在订购新的试剂前先试用实验室的常规方法。Brad ford法是最好的一种可以用来满足所有目的的方法。 不能直接用一种方法的结果与另一种方法进行比较，必须相对浓度来比较，例如，用Bradford 法测量到的牛血清清蛋白的量比其称量的值高两倍。 …

当分离蛋白质时，包含有蛋白质的细胞和细菌须先被裂解。物理法裂解。利用各种机器来完成，例如：1. 氮气气穴弹。氮气解压是裂解真核细胞的一种温和方法，存在于一定压力下的氮气与细胞内的氮气达到平衡。释放压力时，溶液中产生的氮气和间歇的气泡导致单个细胞膜的破裂，但不再有进一步的细胞裂解发生，细胞器还是保持完整，而且氮气产生的压力和气温降低都会保护蛋白质不被降解。2. …