2025年 12 月 5日, 星期五
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转染实验加药问题,做荧光定量是不是铺板的时候加药24小时后转染,做wb就是转染12小时后加药呢?

答:你描述的策略(铺板加药做qPCR,转染后加药做WB)是合理的,并且遵循了两种检测方法对时间需求的不同逻辑:qPCR关注转录早期/中期,WB关注蛋白积累的中/后期。 这不是唯一方案: qPCR: 有时也可以在转染后某个时间点(如6-12小时)加药,再培养足够时间(如再培养18-36小时)后收样,总处理时间也可能达到24-48小时。这取决于药物起效速度和你想 …

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客户问:你好,如果电转以后抗性板子上一个没长,无抗的都长满了,这种情况是没电进去,需要增加次数吗,还是其他原因呢?

回答:“无抗的都长满”,说明细胞活性和数量没问题,基本排除培养条件问题。那么核心矛盾集中在质粒是否成功进入细胞并表达抗性基因。这里有几个关键排查点:质粒浓度是否足够(建议>100ng/μL)、抗性基因是否匹配(如氨苄不能用于表达AmpR的质粒)、抗性板浓度是否正确(过高会杀死阳性克隆)。 特别注意的是检查质粒纯度。实验室常用乙醇沉淀法提质粒,但残留的盐 …

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