病毒感染增强

       慢病毒载体的包装系统一般由两部分组成，即包装成分和载体成分。包装成分由HIV-1基因组去除了包装、逆转录和整合所需的顺式作用序列而构建，能够反式提供产生病毒颗粒所必需的蛋白；载体成分则与包装成分互补，即含有包装、逆转录和整合所需的顺式作用序列，同时具有异源启动子控制下的多克隆位点及在此位点插入的目的基因。将包装成分与载体成分的多个质粒共转染包装 …

1. 制备载体储备液。 2. 以每个靶细胞不同的MOI 或载体剂量转导靶细胞。 腺病毒载体： 100~ 10 000 个病毒颗粒／靶细胞。腺相关病毒载体： 10 000~ 100 000 个病毒基因组／靶细胞。慢病毒载体： MOI5 ~ 500 。 3 在转导后3 ~ 5 天对转入基因的表达进行评价。 对于载体编码蛋白质，有多种方法可用来评价转导细胞中转入基 …

乳胶法（Latex agglutination test）是一种常用于检测抗原或抗体的免疫学方法，通过抗原抗体反应引发乳胶微粒的凝集。乳胶试剂通常含有涂有已知抗原或抗体的乳胶微粒，这些微粒能够与相应的抗原或抗体结合，形成可见的凝集反应。 乳胶法检测失活病毒的可行性 乳胶法 本质上是基于抗原-抗体反应来进行检测的。如果病毒被“失活”（即病毒的活性丧失），但其结 …

类风湿性关节炎(RA)是一种关节炎症性疾病，其特征是慢性滑膜炎、进行性侵蚀和软骨破坏，导致关节变形和疼痛以及关节功能丧失。RA影响全世界0.5-1%的成年人，每年每100000人中诊断出有5_50人患有该病，而且在女性和老年人群中的发病率也更高。如果未经治疗，风湿性关节炎可能导致关节损伤、残疾和生活质量下降，此外还有心血管疾病和其他的并发症。该病的确切病因尚 …

目的基因不能直接整合到大多数真核细胞，常用的手段是将目的基因包装成病毒来感染细胞，从而得到表达满足实验需求。病毒有很多种，常见的有慢病毒和腺病毒。关于慢病毒和腺病毒的原理以及特别前面的文章中都有介绍过，可以搜索关键字查看。今天主要介绍病毒感染细胞的实验流程。 1.构建目的基因到载体 构建手段 一般是根据原始质粒信息确定克隆方案，有以下两种手段。 1）如果原始 …

慢病毒纯化工艺，依据其纯化原理主要分为超速离心、密度梯度离心、PEG离心、超滤、切向流、离子交换层析等方法。当前主要的慢病毒纯化均是由上述中的一种或几种方法组合在一起完成。 对于大部分的细胞感染以及普通的动物实验来说，推荐使用超速离心方法对慢病毒进行浓缩。超滤过程中留下的细胞碎片会导致细胞毒性，直接影响病毒的应用。   病毒上清/粗纯病毒 科研级慢病毒 科研 …

重组腺病毒（AdV）是一种复制缺陷的腺病毒载体系统，在基因治疗、基础生命科学研究等领域被广泛应用。目前常用的腺病毒载体基于人腺病毒5型（Ad5），其基因组是36 kb长的线性双链DNA。腺病毒可通过自身的纤维（fiber）和细胞表面的受体结合被内吞进入细胞，然后从内吞体（endosome）转移到细胞质和细胞核内，借助细胞的转录和翻译机器启动病毒的复制组装。一 …

pShuttle 质粒被用来将携带的目的基因转移到腺病毒载体骨架中。步骤1 ~9 阐述了将目的基因克隆到有双筛选系统的pSh-pkGFP 质粒中。目前在使用的pShuttle 或pSh-pkGFP 中包含一个CMV 启动子驱动的表达盒，，可以用来克隆外源基因或替换启动子。1. 在无菌的05mL 离心管中将外源基因载体和pSh-pkGFP 载体分别用以下条件消 …

核心原则 标准物理滴度测定：强烈推荐使用293T细胞。 功能性滴度测定/特定应用验证：使用你的目标细胞。 详细解释 为什么推荐293T细胞测定物理滴度？ 高易感性： 293T细胞对慢病毒感染非常敏感，因为它们高表达慢病毒进入所需的受体（如LDL受体）。 高转导效率： 它们通常能达到非常高的转导效率（>80%甚至90%+），这使得检测阳性细胞、计算滴度变 …

  慢病毒 腺病毒 腺相关病毒 外源基因表达时间 2-4天开始表达长时间稳定表达 1-2天开始表达 持续7-14天 7-14开始表达 细胞分裂不旺盛部位可长时间表达 AAV一般注射动物后，会在1周左右开始表达，体内实验一般建议感染后3-4周看第一批结果。持续时间可以长达两年以上。在体内，细胞的生存周期会很长，特别是一些神经元细胞。所以只要细胞不死，AAV基本 …