英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
Crispr/Cas9 简介 CRISPR (clustered, regularly interspaced, short palindromic repeats)是一种来自细菌降解入侵的病毒 DNA 或其他外源 DNA 的免疫机制。目前，来自Streptococcus pyogenes 的CRISPR-Cas9系统应用最为广泛。Cas9 蛋白（含有两个核 …
阅读更多 »293T分别包装两种病毒，浓缩后混合感染鼠CD8+ T细胞可以吗？
原则上可以，具体要看以下几个条件： 步骤可行性： 分别包装：在293T细胞中分别转染两种构建（比如psPAX2 + pMD2.G + 各自的载体），收集病毒上清； 浓缩：超速离心或PEG浓缩，两种病毒分别处理； 混合感染：感染前混合两种浓缩后的病毒，用于感染小鼠CD8+ T细胞。 技术要点： T细胞激活：CD8+ T细胞对逆转录病毒天然不易感染，通常需要先用 …
阅读更多 »直接克隆法构建重组腺病毒基因组
pShuttle 质粒被用来将携带的目的基因转移到腺病毒载体骨架中。步骤1 ~9 阐述了将目的基因克隆到有双筛选系统的pSh-pkGFP 质粒中。目前在使用的pShuttle 或pSh-pkGFP 中包含一个CMV 启动子驱动的表达盒，，可以用来克隆外源基因或替换启动子。1. 在无菌的05mL 离心管中将外源基因载体和pSh-pkGFP 载体分别用以下条件消 …
阅读更多 »自噬依赖的Axin2+癌干细胞生成促进肝硬化中的肝癌发生
标题：Autophagy-dependent generation of Axin2+ cancer stem-like cells promotes hepatocarcinogenesis in liver cirrhosis 影响因子：（Oncogene，2017年）：7.385（2023年最新IF为8.0，JCR Q1区） 文献概要：自噬是肝硬化的一 …
阅读更多 »腺病毒适用于哪些细胞？
重组腺病毒（AdV）是一种复制缺陷的腺病毒载体系统，在基因治疗、基础生命科学研究等领域被广泛应用。目前常用的腺病毒载体基于人腺病毒5型（Ad5），其基因组是36 kb长的线性双链DNA。腺病毒可通过自身的纤维（fiber）和细胞表面的受体结合被内吞进入细胞，然后从内吞体（endosome）转移到细胞质和细胞核内，借助细胞的转录和翻译机器启动病毒的复制组装。一 …
阅读更多 »病毒感染增强剂Envirus使用时出现细胞毒性怎么办？
出现细胞毒性的原因有： 1.增强剂用量过大。建议适当减少增强剂用量。 2.病毒量过大。适当减少病毒用量。 3.适当减少病毒用量。增加培养基量或更换培养基。
阅读更多 »慢病毒感染后，细胞不生长原因？
慢病毒感染后，细胞不生长可能有多种原因。 以下是一些常见的原因和解决方法： 1) 病毒滴度过高: 原因：高滴度的慢病毒可能导致细胞毒性，使细胞无法正常生长。 解决方法：降低病毒的滴度，进行一系列稀释实验，找到一个既能有效转染又不影响细胞生长的滴度。 2) 细胞状态不佳： 原因：感染前细胞的健康状态可能影响感染后的生长。 解决方法：确保细胞在最佳状态下进行感染 …
阅读更多 »慢病毒感染贴壁细胞实验方法
1.提前一天细胞铺板 提前一天种植细胞，以感染时细胞融合度在50%左右为宜(悬浮细胞根据需要调整，不要采用过高的细胞密度)。 感染实验 ⑴将EnvirusTM-LV用无血清稀释液稀释(用量参见下表)，充分混匀，制成增强剂稀释液。 ⑵将病毒浓缩液用无血清稀释液稀释(用量参见下表)，充分混匀，制成病毒稀释液。 注：由于病毒浓度情况不同，具体病毒浓缩液用量酌情依据 …
阅读更多 »慢病毒浓缩纯化的方法有哪些？
慢病毒纯化工艺，依据其纯化原理主要分为超速离心、密度梯度离心、PEG离心、超滤、切向流、离子交换层析等方法。当前主要的慢病毒纯化均是由上述中的一种或几种方法组合在一起完成。 对于大部分的细胞感染以及普通的动物实验来说，推荐使用超速离心方法对慢病毒进行浓缩。超滤过程中留下的细胞碎片会导致细胞毒性，直接影响病毒的应用。 病毒上清/粗纯病毒 科研级慢病毒 科研 …
阅读更多 »Cell Death Discovery | 南京大学口腔医学院：牙周膜成纤维细胞铁下垂机制新发现
《Cell Death Discovery》期刊上发表的题为“Periodontitis-level butyrate-induced ferroptosis in periodontal ligament fibroblasts by activation of ferritinophagy“的文章表明牙周炎水平的丁酸盐通过激活 NCOA4 …
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