2024年 3月 29日, 星期五
新闻

病毒感染增强

腺病毒适用于哪些细胞?

重组腺病毒(AdV)是一种复制缺陷的腺病毒载体系统,在基因治疗、基础生命科学研究等领域被广泛应用。目前常用的腺病毒载体基于人腺病毒5型(Ad5),其基因组是36 kb长的线性双链DNA。腺病毒可通过自身的纤维(fiber)和细胞表面的受体结合被内吞进入细胞,然后从内吞体(endosome)转移到细胞质和细胞核内,借助细胞的转录和翻译机器启动病毒的复制组装。一 …

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为什么选择AAV作为基因治疗的病毒载体?

AAV,即腺相关病毒载体,属于细小病毒科依赖病毒属。野生型AAV感染人宿主细胞后,可以整合到人类19号染色体的AAVS1位点,但AAV不会引起人类疾病。实际上,我们市面常见的AAV并不是野生型AAV,而是重组AAV(rAAV)。 AAV和AAV载体的基因组结构(图片来源:Semantic Scholar)     目前来看,rAAV相比较其他病毒载体,未发现 …

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如何解决病毒感染细胞效率低的难题?

     病毒感染细胞本来效率就较低,一定要注意以下几点:1.感染时的培养基尽量少些;2. 每1ml的培养基中加入5-10ul的Polybrene(储存液浓度为2mg/ml ),可以提高效率约3-5倍。不过病毒感染效率的问题都是相对的,达到自己的研究目的即可。      病毒感染 …

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做慢病毒感染实验前,你需要哪些知识储备?

慢病毒载体的构建: 慢病毒载体的包装系统一般由两部分组成,即包装成分和载体成分。包装成分由HIV-1基因组去除了包装、逆转录和整合所需的顺式作用序列而构建,能够反式提供产生病毒颗粒所必需的蛋白;载体成分则与包装成分互补,即含有包装、逆转录和整合所需的顺式作用序列,同时具有异源启动子控制下的多克隆位点及在此位点插入的目的基因。将包装成分与载体成分的多个质粒共转 …

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直接克隆法构建重组腺病毒基因组

pShuttle 质粒被用来将携带的目的基因转移到腺病毒载体骨架中。步骤1 ~9 阐述了将目的基因克隆到有双筛选系统的pSh-pkGFP 质粒中。目前在使用的pShuttle 或pSh-pkGFP 中包含一个CMV 启动子驱动的表达盒,,可以用来克隆外源基因或替换启动子。1. 在无菌的05mL 离心管中将外源基因载体和pSh-pkGFP 载体分别用以下条件消 …

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腺病毒实验常见问题

1、腺病毒载体对目的基因的长度是否有要求? 有要求。对E1和E3双缺失的腺病毒载体,比如AdMax的Kit C、Kit D等,其总包装的外源片断要求小于8 kb。而对于只有E1缺失或E3缺失的载体,比如Kit A、Kit B等,外源片断要求小于5 kb。注意,外源片断指包括启动子、外源基因和poly A等在内的整个插入片断。 2、如何提高腺病毒的活性? 提高 …

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慢病毒感染与PD-1和嵌合抗原受体修饰的T细胞抗肿瘤功能研究

       嵌合抗原受体修饰的T(CAR-T)细胞对血液恶性肿瘤具有很强的抗肿瘤活性。然而,将这一成功转化为实体瘤仍然令人沮丧。在实体瘤的治疗中,CAR-T治疗面临着免疫抑制环境等巨大困难。在抑制环境的建立中,程序性死亡因子-1(pd-1)/程序性死亡因子配体1(pd-l1)轴被认为起关键作用。现分享一篇慢病毒感染(envirus)与PD-1和嵌合抗原受体 …

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病毒转染原理及步骤

病毒转染原理及步骤   在细胞相关的实验操作中,对于一些按常规方法难以转染甚至无法转染的细胞,通过病毒介导的实验能够大大提高基因的转导效率,以达到目的基因的高效瞬时表达。   病毒转染包括以下步骤:1构建载体 2包装提纯病毒 3感染靶细胞。以慢病毒为例。 慢病毒(Lentivirus)载体是以HIV-1(人类免疫缺陷I型病毒)为基础发展起 …

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