2023年 6月 7日, 星期三
新闻

病毒感染增强

为什么选择AAV作为基因治疗的病毒载体?

AAV,即腺相关病毒载体,属于细小病毒科依赖病毒属。野生型AAV感染人宿主细胞后,可以整合到人类19号染色体的AAVS1位点,但AAV不会引起人类疾病。实际上,我们市面常见的AAV并不是野生型AAV,而是重组AAV(rAAV)。 AAV和AAV载体的基因组结构(图片来源:Semantic Scholar)     目前来看,rAAV相比较其他病毒载体,未发现 …

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慢病毒载体构建原理

       慢病毒载体的包装系统一般由两部分组成,即包装成分和载体成分。包装成分由HIV-1基因组去除了包装、逆转录和整合所需的顺式作用序列而构建,能够反式提供产生病毒颗粒所必需的蛋白;载体成分则与包装成分互补,即含有包装、逆转录和整合所需的顺式作用序列,同时具有异源启动子控制下的多克隆位点及在此位点插入的目的基因。将包装成分与载体成分的多个质粒共转染包装 …

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如何解决病毒感染细胞效率低的难题?

     病毒感染细胞本来效率就较低,一定要注意以下几点:1.感染时的培养基尽量少些;2. 每1ml的培养基中加入5-10ul的Polybrene(储存液浓度为2mg/ml ),可以提高效率约3-5倍。不过病毒感染效率的问题都是相对的,达到自己的研究目的即可。      病毒感染 …

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如何利用好腺病毒感染的原理和特点?

一、原理 腺病毒(Adenovirus,Ad)是一种无包膜的线状双链DNA病毒,其复制不依赖于宿主细胞的分裂。有近50个血清型,大多数Ad载体都是基于血清型2和5,通过转基因的方式取代E1和E3基因,降低病毒的复制能力。这些重组病毒仅在高水平表达E1和E3基因的细胞中复制,因此是一种适用于治疗的高效控制系统。 二、特点 1) 几乎可以感染所有类型的细胞 2) …

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腺病毒实验常见问题

1、腺病毒载体对目的基因的长度是否有要求? 有要求。对E1和E3双缺失的腺病毒载体,比如AdMax的Kit C、Kit D等,其总包装的外源片断要求小于8 kb。而对于只有E1缺失或E3缺失的载体,比如Kit A、Kit B等,外源片断要求小于5 kb。注意,外源片断指包括启动子、外源基因和poly A等在内的整个插入片断。 2、如何提高腺病毒的活性? 提高 …

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病毒感染细胞实验整体流程

目的基因不能直接整合到大多数真核细胞,常用的手段是将目的基因包装成病毒来感染细胞,从而得到表达满足实验需求。病毒有很多种,常见的有慢病毒和腺病毒。关于慢病毒和腺病毒的原理以及特别前面的文章中都有介绍过,可以搜索关键字查看。今天主要介绍病毒感染细胞的实验流程。 1.构建目的基因到载体 构建手段 一般是根据原始质粒信息确定克隆方案,有以下两种手段。 1)如果原始 …

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腺病毒适用于哪些细胞?

重组腺病毒(AdV)是一种复制缺陷的腺病毒载体系统,在基因治疗、基础生命科学研究等领域被广泛应用。目前常用的腺病毒载体基于人腺病毒5型(Ad5),其基因组是36 kb长的线性双链DNA。腺病毒可通过自身的纤维(fiber)和细胞表面的受体结合被内吞进入细胞,然后从内吞体(endosome)转移到细胞质和细胞核内,借助细胞的转录和翻译机器启动病毒的复制组装。一 …

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如何选择慢病毒和腺病毒系统?

慢病毒载体系统和腺病毒载体系统比较 病毒表达系统 慢病毒表达系统(Lentivirus) 腺病毒表达系统(Adenovirus) 病毒基因组 RNA病毒 双链DNA病毒 复制 自主复制 自主复制 是否整合 病毒基因组整合于宿主基因组,长时间、稳定表达外源基因 病毒基因组游离于宿主基因组外,瞬时表达外源基因 感染细胞类型 感染分裂和不分裂细胞,适用于难转染的原 …

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