2025年 2 月 19日, 星期三
新闻

病毒感染增强

慢病毒感染,胶体金测出来很高,可感染效果很差的原因

慢病毒感染效率低,尽管用胶体金测试显示滴度很高,可能有以下几个原因: 病毒颗粒质量:虽然胶体金检测显示病毒滴度很高,但这并不意味着所有的病毒颗粒都是功能性的。有可能病毒颗粒已经失活或者结构受损,无法有效感染目标细胞。 病毒浓度与效价的差异:胶体金检测主要测量病毒颗粒的数量,但这些颗粒不一定都具有感染性。有效感染的病毒颗粒(感染性单位)可能比实际检测的数量要低 …

阅读更多 »

慢病毒感染贴壁细胞实验方法

1.提前一天细胞铺板 提前一天种植细胞,以感染时细胞融合度在50%左右为宜(悬浮细胞根据需要调整,不要采用过高的细胞密度)。 感染实验 ⑴将EnvirusTM-LV用无血清稀释液稀释(用量参见下表),充分混匀,制成增强剂稀释液。 ⑵将病毒浓缩液用无血清稀释液稀释(用量参见下表),充分混匀,制成病毒稀释液。 注:由于病毒浓度情况不同,具体病毒浓缩液用量酌情依据 …

阅读更多 »

如何选择慢病毒和腺病毒系统?

慢病毒载体系统和腺病毒载体系统比较 病毒表达系统 慢病毒表达系统(Lentivirus) 腺病毒表达系统(Adenovirus) 病毒基因组 RNA病毒 双链DNA病毒 复制 自主复制 自主复制 是否整合 病毒基因组整合于宿主基因组,长时间、稳定表达外源基因 病毒基因组游离于宿主基因组外,瞬时表达外源基因 感染细胞类型 感染分裂和不分裂细胞,适用于难转染的原 …

阅读更多 »

病毒包装过程中,细胞大量死亡,还有必要收集病毒吗

在病毒包装过程中,如果观察到细胞大量死亡,是否还要收集病毒需要根据具体情况判断。以下是一些可能的考虑因素: 病毒滴度:尽管细胞大量死亡,仍然有可能产生高滴度的病毒。如果病毒滴度足够高,可以继续收集病毒用于后续实验。 污染:细胞大量死亡可能是由于污染引起的。如果怀疑有细菌、真菌或支原体污染,收集病毒可能不是一个好主意,因为污染会影响后续实验的准确性。 病毒本身 …

阅读更多 »

使用带有GFP荧光标记的慢病毒感染细胞,想要检测GFP阳性率,通常用什么方法?

如果您使用的是带有GFP荧光标记的慢病毒感染细胞,想要检测GFP阳性率,通常情况下可以通过流式细胞仪来实现,步骤如下: 收集细胞:首先收集感染后的细胞,并用适当的缓冲液进行重悬。 去除死细胞:可以通过加PI(碘化丙啶)或7-AAD等染料来排除死细胞,这样有助于提高检测的准确性。 流式检测:使用流式细胞仪时,选择FITC通道(通常是FL1通道),因为GFP的荧 …

阅读更多 »

转导细胞的检测分析

1. 制备载体储备液。 2. 以每个靶细胞不同的MOI 或载体剂量转导靶细胞。 腺病毒载体: 100~ 10 000 个病毒颗粒/靶细胞。腺相关病毒载体: 10 000~ 100 000 个病毒基因组/靶细胞。慢病毒载体: MOI5 ~ 500 。 3 在转导后3 ~ 5 天对转入基因的表达进行评价。 对于载体编码蛋白质,有多种方法可用来评价转导细胞中转入基 …

阅读更多 »

慢病毒感染细胞常见问题分析

1.用于慢病毒感染的细胞接种量是多少? 根据细胞增殖的速度调整细胞接种量,以保证在感染后4天左右细胞刚好快长满培养皿底部为宜。 针对大部分细胞系:传代周期在2-3天,感染时细胞铺板的密度保持在20-30%左右,则72h后细胞增殖后铺板密度约在90%左右; 针对某些原代细胞: 由于细胞增长缓慢,可以在接种时提高汇合度到50%~60%,但要确保在感染后4天时细胞 …

阅读更多 »

AAV载体中启动子和特殊原件的含义是什么?

hsyn:神经元特异启动子; GFAP:星形胶质细胞特异启动子; Ubiquitin:一种常用的组成型启动子。 IRES:内部核酶进入位点,起到连接两个基因,在一个启动子驱动下转录的作用。IRES连接的两个基因不会融合表达,IRES的RNA可以招募核糖体,翻译下游基因,但是IRES是一种再招募的过程,其后基因的mRNA的翻译量低于自身mRNA的数量,所以表达 …

阅读更多 »

AAV 载体

腺相关病毒(AAV) 是第一个也是唯一的改造用于基因递送的ssDNA 病毒,无包膜,直径20~26nm 的二十面体核衣壳包裹着一条4.7kb 线性ssDNA 基因组。腺相关病毒是已知最小的哺乳动物病毒,因最早发现为腺病毒样本中的一个病毒污染成分而得名。没有辅助病毒,如腺病毒共感染时,它的天然复制能力缺失,与任何人类疾病不相关(Daya and Berns 2 …

阅读更多 »

如何使动物体内病毒感染效率提高20-50倍

由于动物体内环境的复杂性,我们在选择动物体内病毒感染试剂时,会区别于细胞实验。通常为避免动物产生过激的免疫反应或者死亡,这类病毒感染试剂纯度会更高些,并且适配体液环境。因此,争对动物体内病毒感染实验,则需要适配特定的动物体内病毒感染增强试剂。 发表在《aging》上的一篇题为“Ubenimex induces autophagy inhibition and …

阅读更多 »