病毒感染细胞本来效率就较低,一定要注意以下几点:1.感染时的培养基尽量少些;2. 每1ml的培养基中加入5-10ul的Polybrene(储存液浓度为2mg/ml ),可以提高效率约3-5倍。不过病毒感染效率的问题都是相对的,达到自己的研究目的即可。 病毒感染 …
阅读更多 »慢病毒感染细胞常见问题分析
1.用于慢病毒感染的细胞接种量是多少? 根据细胞增殖的速度调整细胞接种量,以保证在感染后4天左右细胞刚好快长满培养皿底部为宜。 针对大部分细胞系:传代周期在2-3天,感染时细胞铺板的密度保持在20-30%左右,则72h后细胞增殖后铺板密度约在90%左右; 针对某些原代细胞: 由于细胞增长缓慢,可以在接种时提高汇合度到50%~60%,但要确保在感染后4天时细胞 …
阅读更多 »如何选择慢病毒和腺病毒系统?
慢病毒载体系统和腺病毒载体系统比较 病毒表达系统 慢病毒表达系统(Lentivirus) 腺病毒表达系统(Adenovirus) 病毒基因组 RNA病毒 双链DNA病毒 复制 自主复制 自主复制 是否整合 病毒基因组整合于宿主基因组,长时间、稳定表达外源基因 病毒基因组游离于宿主基因组外,瞬时表达外源基因 感染细胞类型 感染分裂和不分裂细胞,适用于难转染的原 …
阅读更多 »什么是腺病毒载体?
腺病毒属于腺病毒科,分为两个属:禽腺病毒属(鸟腺病毒)和哺乳动物腺病毒属(人、猴、牛、马、猪、羊、犬和负鼠腺病毒)。这些病毒均携带一个线性双链DNA 基因组,由直径为70~100mm 的二十面体衣壳蛋白包裹。约36kb 的基因组包括4 个提供调控和复制功能的早期转录单位(El 、E2 、E3 、E4) 、2 个延迟早期单位(IX 和IVa2)和1 个指导包括 …
阅读更多 »AAV 载体
腺相关病毒(AAV) 是第一个也是唯一的改造用于基因递送的ssDNA 病毒,无包膜,直径20~26nm 的二十面体核衣壳包裹着一条4.7kb 线性ssDNA 基因组。腺相关病毒是已知最小的哺乳动物病毒,因最早发现为腺病毒样本中的一个病毒污染成分而得名。没有辅助病毒,如腺病毒共感染时,它的天然复制能力缺失,与任何人类疾病不相关(Daya and Berns 2 …
阅读更多 »高滴度反转录病毒和慢病毒载体的制备
一、试剂 CaCl2 溶液( 2mol/L )、完全培养基、DMEM 培养基、乙醇(或异丙醇) (70% )、胎牛血清( FBS )、HBS 溶液(2X)、HEPES (2.5mmol/L, pH 7.3)、OptiMEM+ 1 %青霉素/链霉素( P/S )、OptiMEM , 无P/S、pCMVDΔR8.91 质粒、pUMVC 质粒、pVSV- G 质粒 …
阅读更多 »病毒感染细胞过程中常出现的问题及解决方案
病毒感染增强剂envirus使用中常出现的问题及解决方案如下:
阅读更多 »慢病毒、腺病毒、AAV 的检测周期分别是多长?
慢病毒 腺病毒 腺相关病毒 外源基因表达时间 2-4天开始表达长时间稳定表达 1-2天开始表达 持续7-14天 7-14开始表达 细胞分裂不旺盛部位可长时间表达 AAV一般注射动物后,会在1周左右开始表达,体内实验一般建议感染后3-4周看第一批结果。持续时间可以长达两年以上。在体内,细胞的生存周期会很长,特别是一些神经元细胞。所以只要细胞不死,AAV基本 …
阅读更多 »Cell Death Discovery | 南京大学口腔医学院:牙周膜成纤维细胞铁下垂机制新发现
《Cell Death Discovery》期刊上发表的题为“Periodontitis-level butyrate-induced ferroptosis in periodontal ligament fibroblasts by activation of ferritinophagy“的文章表明牙周炎水平的丁酸盐通过激活 NCOA4 …
阅读更多 »慢病毒载体
慢病毒属于反转录病毒科,与该科其他病毒一样,病毒粒子携带ssRNA, 必须反转录并整合至宿主细胞基因组(原病毒)产生有效感染。慢病毒的显著特点是其基因组复杂、圆柱形或圆锥形的核衣壳携带病毒基因组。核衣壳被携带包膜糖蛋白的双层膜包裹,包膜糖蛋白负责与细胞表面受体进行相互作用及进入宿主细胞。反转录病毒是几乎所有脊椎动物的主要病原体。人类免疫缺陷病毒l 型(HIV …
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