慢病毒载体系统和腺病毒载体系统比较 病毒表达系统 慢病毒表达系统(Lentivirus) 腺病毒表达系统(Adenovirus) 病毒基因组 RNA病毒 双链DNA病毒 复制 自主复制 自主复制 是否整合 病毒基因组整合于宿主基因组,长时间、稳定表达外源基因 病毒基因组游离于宿主基因组外,瞬时表达外源基因 感染细胞类型 感染分裂和不分裂细胞,适用于难转染的原 …
阅读更多 »慢病毒感染后,细胞不生长怎么办
慢病毒感染后,细胞不生长可能有多种原因。以下是一些常见的原因和解决方法: 病毒滴度过高: 原因:高滴度的慢病毒可能导致细胞毒性,使细胞无法正常生长。 解决方法:降低病毒的滴度,进行一系列稀释实验,找到一个既能有效转染又不影响细胞生长的滴度。 细胞状态不佳: 原因:感染前细胞的健康状态可能影响感染后的生长。 解决方法:确保细胞在最佳状态下进行感染,例如在感染前 …
阅读更多 »做慢病毒滴度测定实验,请问是所有的都用293t细胞来做,还是说我要在别的细胞上做稳转株,我用别的细胞去摸病毒滴度就可以呀?
核心原则 标准物理滴度测定:强烈推荐使用293T细胞。 功能性滴度测定/特定应用验证:使用你的目标细胞。 详细解释 为什么推荐293T细胞测定物理滴度? 高易感性: 293T细胞对慢病毒感染非常敏感,因为它们高表达慢病毒进入所需的受体(如LDL受体)。 高转导效率: 它们通常能达到非常高的转导效率(>80%甚至90%+),这使得检测阳性细胞、计算滴度变 …
阅读更多 »如何解决病毒感染细胞效率低的难题?
病毒感染细胞本来效率就较低,一定要注意以下几点:1.感染时的培养基尽量少些;2. 使用病毒感染增强剂Envirus-LV来提高感染效率。 病毒感染细胞本来效率就较低,整个过程相对复杂难操作,一般一次花费周期至少两三个月,多则几个月到十几个月不等,经费也是几万到十几万。万一实验失败需要重复操作会花费更多的时间和开支。所以有效提高病毒转染效 …
阅读更多 »同样是慢病毒感染,为什么你的感染效率那么低?
在慢病毒感染细胞过程中,会遇到哪些问题呢? 1.在细胞感染时, MOI是一个非常重要的指标,如何确定MOI值呢? MOI:复感染指数,是指病毒对细胞的感染能力,MOI越高,细胞越难被感染。通常把某株细胞有80%被感染时所用的病毒颗粒数和细胞数目的比值作为该株细胞的MOI。 MOI=(病毒滴度×病毒体积)/细胞数目 感染条件及MOI的选择原则: 1. 在细胞形 …
阅读更多 »慢病毒、腺病毒、AAV 的检测周期分别是多长?
慢病毒 腺病毒 腺相关病毒 外源基因表达时间 2-4天开始表达长时间稳定表达 1-2天开始表达 持续7-14天 7-14开始表达 细胞分裂不旺盛部位可长时间表达 AAV一般注射动物后,会在1周左右开始表达,体内实验一般建议感染后3-4周看第一批结果。持续时间可以长达两年以上。在体内,细胞的生存周期会很长,特别是一些神经元细胞。所以只要细胞不死,AAV基本 …
阅读更多 »如何选择腺病毒、慢病毒、腺相关病毒?
病毒表达系统 腺病毒(Adenovirus) 慢病毒(Lentivirus) 腺相关病毒(Adeno-As sociate virus) 病毒基因组 双链DNA病毒 RNA病毒 单链DNA病毒 复制 条件复制 不可复制 条件复制 滴度 最高可达1012pfu/ml 最高可达109TU/ml 最高可达1012-13v.g/ml 感染细胞类型 感染分裂和不分裂细 …
阅读更多 »老年小鼠术后认知障碍机制研究:一种新的机制和治疗靶点
英文标题: CircITSN1/EIF4A3/Itsn1 axis mediates postoperative cognitive dysfunction in aged mice: A novel mechanism and therapeutic target 影响因子 该文章发表于 《Molecular Therapy: Nucleic Acids》 …
阅读更多 »靶向eIF4G1根除胰腺癌研究
文献标题 Reprograming immunosuppressive microenvironment by eIF4G1 targeting to eradicate pancreatic ductal adenocarcinoma 期刊与影响因子 期刊: Cell Reports Medicine 影响因子:14.3(2024年) 英格恩(Engree …
阅读更多 »做嘌呤霉素筛选滴定时,感染两天,puro杀3天,5天细胞长得很密原因和解决方法,另外镜下数整个孔的克隆数感觉困难,能换成镜下视野面积与孔面积比换算吗?
问题1:“感染两天,puro杀3天,5天细胞都长很密” 原因: 细胞分裂快(比如 293T)→ 在5天内即使有筛选,还是会长满。 感染率高 → 很多细胞表达抗性,嘌呤霉素筛选不够“稀释” 建议: 缩短时间:感染 24h 后就加 puromycin,第 2 天开始杀,杀 2–3 天就足够。 更稀释的病毒梯度:推荐加大稀释倍数:1:1000,1:5000,甚至 …
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