英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
1、腺病毒载体对目的基因的长度是否有要求？ 有要求。对E1和E3双缺失的腺病毒载体，比如AdMax的Kit C、Kit D等，其总包装的外源片断要求小于8 kb。而对于只有E1缺失或E3缺失的载体，比如Kit A、Kit B等，外源片断要求小于5 kb。注意，外源片断指包括启动子、外源基因和poly A等在内的整个插入片断。 2、如何提高腺病毒的活性？ 提高 …
阅读更多 »腺病毒适用于哪些细胞？
重组腺病毒（AdV）是一种复制缺陷的腺病毒载体系统，在基因治疗、基础生命科学研究等领域被广泛应用。目前常用的腺病毒载体基于人腺病毒5型（Ad5），其基因组是36 kb长的线性双链DNA。腺病毒可通过自身的纤维（fiber）和细胞表面的受体结合被内吞进入细胞，然后从内吞体（endosome）转移到细胞质和细胞核内，借助细胞的转录和翻译机器启动病毒的复制组装。一 …
阅读更多 »病毒包装过程中，细胞大量死亡，还有必要收集病毒吗
在病毒包装过程中，如果观察到细胞大量死亡，是否还要收集病毒需要根据具体情况判断。以下是一些可能的考虑因素： 病毒滴度：尽管细胞大量死亡，仍然有可能产生高滴度的病毒。如果病毒滴度足够高，可以继续收集病毒用于后续实验。 污染：细胞大量死亡可能是由于污染引起的。如果怀疑有细菌、真菌或支原体污染，收集病毒可能不是一个好主意，因为污染会影响后续实验的准确性。 病毒本身 …
阅读更多 »怎么根据病毒的TCID50计算给毒的MOI值
根据病毒的TCID50值计算给毒的MOI（Multiplicity of Infection，感染倍数）通常需要几个步骤。MOI 是指每个宿主细胞上平均感染的病毒颗粒数。 步骤概述： 知道病毒的TCID50值：TCID50 是一种病毒活性的度量，表示每单位体积（通常为每毫升）病毒悬液中，能在 50% 的细胞文化中引起感染的病毒数量。单位通常是病毒颗粒数/毫升 …
阅读更多 »病毒感染增强剂Envirus使用时出现细胞毒性怎么办？
出现细胞毒性的原因有： 1.增强剂用量过大。建议适当减少增强剂用量。 2.病毒量过大。适当减少病毒用量。 3.适当减少病毒用量。增加培养基量或更换培养基。
阅读更多 »慢病毒感染与PD-1和嵌合抗原受体修饰的T细胞抗肿瘤功能研究
嵌合抗原受体修饰的T（CAR-T）细胞对血液恶性肿瘤具有很强的抗肿瘤活性。然而，将这一成功转化为实体瘤仍然令人沮丧。在实体瘤的治疗中，CAR-T治疗面临着免疫抑制环境等巨大困难。在抑制环境的建立中，程序性死亡因子-1（pd-1）/程序性死亡因子配体1（pd-l1）轴被认为起关键作用。现分享一篇慢病毒感染（envirus）与PD-1和嵌合抗原受体 …
阅读更多 »是否有嘌呤霉素筛选标记的病毒的病毒滴定protocol，看了好多好多不一样的?这个有比较权威又大众的滴度操作流程吗？
关于使用嘌呤霉素筛选标记（puromycin resistance marker）的慢病毒（lentivirus）或逆转录病毒（retrovirus）进行病毒滴定（virus titration）的 protocol，确实有不少不同的做法，这是因为不同实验室根据自己的系统和需求进行了优化。但是，有一些权威且广泛应用的标准流程可以作为通用参考，下面是整理的一个 …
阅读更多 »提高慢病毒感染细胞效率的方法
可使用病毒感染增强剂envirus提高病毒的感染效率，下面以慢病毒为例，说一下实验过程。 1.提前一天细胞铺板 提前一天将细胞种植在24孔板中，以感染时细胞融合度在50%左右为宜(悬浮细胞根据需要调整，不要采用过高的细胞密度)。 2.感染 ⑴将2ul的Envirus-LV用25μl无血清稀释液稀释，充分混匀，制成Envirus-LV稀释液。4℃静置5分钟。 …
阅读更多 »如何利用好腺病毒感染的原理和特点？
一、原理 腺病毒(Adenovirus，Ad)是一种无包膜的线状双链DNA病毒，其复制不依赖于宿主细胞的分裂。有近50个血清型，大多数Ad载体都是基于血清型2和5，通过转基因的方式取代E1和E3基因，降低病毒的复制能力。这些重组病毒仅在高水平表达E1和E3基因的细胞中复制，因此是一种适用于治疗的高效控制系统。 二、特点 1） 几乎可以感染所有类型的细胞 2） …
阅读更多 »慢病毒适用于哪些细胞？
慢病毒（Lentivirus）载体是以 HIV-1 （人类免疫缺陷1型病毒）为基础发展起来的基因治疗载体。具有感染谱广泛、可以有效感染分裂期和静止期细胞、长期稳定表达外源基因等优点，因此成为导入外源基因的有力工具。现在慢病毒系统已经被广泛应用到各种细胞系的基因过表达、RNA干扰、microRNA研究以及活体动物实验中。 慢病毒有如下特点： ● 感染范围广 …
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