英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
问题1：“感染两天，puro杀3天，5天细胞都长很密” 原因： 细胞分裂快（比如 293T）→ 在5天内即使有筛选，还是会长满。 感染率高 → 很多细胞表达抗性，嘌呤霉素筛选不够“稀释” 建议： 缩短时间：感染 24h 后就加 puromycin，第 2 天开始杀，杀 2–3 天就足够。 更稀释的病毒梯度：推荐加大稀释倍数：1:1000，1:5000，甚至 …
阅读更多 »慢病毒感染贴壁细胞实验方法
1.提前一天细胞铺板 提前一天种植细胞，以感染时细胞融合度在50%左右为宜(悬浮细胞根据需要调整，不要采用过高的细胞密度)。 感染实验 ⑴将EnvirusTM-LV用无血清稀释液稀释(用量参见下表)，充分混匀，制成增强剂稀释液。 ⑵将病毒浓缩液用无血清稀释液稀释(用量参见下表)，充分混匀，制成病毒稀释液。 注：由于病毒浓度情况不同，具体病毒浓缩液用量酌情依据 …
阅读更多 »慢病毒倍比稀释测定活性的实验中，DAY2天时，把稀释好的病毒和细胞孵育过夜时，用把细胞原培养基吸取出去吗，还是直接把病毒液添加进去？
好问题！在进行 慢病毒倍比稀释测定病毒滴度（titer） 的时候，DAY2 加入病毒时是否更换培养基，确实是一个关键点，对感染效率有一定影响。下面是两种常见操作方式，以及推荐做法： 推荐操作：先吸掉培养基，再加病毒（常规做法） 流程简述（以DAY2为节点）： DAY1：铺板细胞（如293T、HEK293，常用于测滴度）； DAY2：感染操作 吸掉旧培养基； …
阅读更多 »提高慢病毒感染细胞效率的方法
可使用病毒感染增强剂envirus提高病毒的感染效率，下面以慢病毒为例，说一下实验过程。 1.提前一天细胞铺板 提前一天将细胞种植在24孔板中，以感染时细胞融合度在50%左右为宜(悬浮细胞根据需要调整，不要采用过高的细胞密度)。 2.感染 ⑴将2ul的Envirus-LV用25μl无血清稀释液稀释，充分混匀，制成Envirus-LV稀释液。4℃静置5分钟。 …
阅读更多 »自噬依赖性Axin2+癌症干细胞样细胞促进肝硬化肝癌发生
文献标题 英文： Autophagy-dependent generation of Axin2+ cancer stem-like cells promotes hepatocarcinogenesis in liver cirrhosis 中文： 自噬依赖性Axin2+癌症干细胞样细胞的产生促进肝硬化中的肝癌发生 影响因子 7.385 (注：此该文章发表 …
阅读更多 »AAV载体中启动子和特殊原件的含义是什么？
hsyn：神经元特异启动子； GFAP：星形胶质细胞特异启动子； Ubiquitin：一种常用的组成型启动子。 IRES：内部核酶进入位点，起到连接两个基因，在一个启动子驱动下转录的作用。IRES连接的两个基因不会融合表达，IRES的RNA可以招募核糖体，翻译下游基因，但是IRES是一种再招募的过程，其后基因的mRNA的翻译量低于自身mRNA的数量，所以表达 …
阅读更多 »怎么根据病毒的TCID50计算给毒的MOI值
根据病毒的TCID50值计算给毒的MOI（Multiplicity of Infection，感染倍数）通常需要几个步骤。MOI 是指每个宿主细胞上平均感染的病毒颗粒数。 步骤概述： 知道病毒的TCID50值：TCID50 是一种病毒活性的度量，表示每单位体积（通常为每毫升）病毒悬液中，能在 50% 的细胞文化中引起感染的病毒数量。单位通常是病毒颗粒数/毫升 …
阅读更多 »如何解决病毒感染细胞效率低的难题？
病毒感染细胞本来效率就较低，一定要注意以下几点：1.感染时的培养基尽量少些；2. 使用病毒感染增强剂Envirus-LV来提高感染效率。 病毒感染细胞本来效率就较低，整个过程相对复杂难操作，一般一次花费周期至少两三个月，多则几个月到十几个月不等，经费也是几万到十几万。万一实验失败需要重复操作会花费更多的时间和开支。所以有效提高病毒转染效 …
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