英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
转染效率低的原因可从以下几方面找： 1.质粒DNA或混和液中含有血清。 对策：用无血清培养基或Opti-MEM培养基。 2.质粒DNA和转染试剂的比率不是最优 对策：对大多数细胞而言，质粒DNA和转染试剂的比例为1:2-1:3，一般要做优化实验，比例从1:0.5-1:5 逐一检测。 3.质粒DNA 已部分降解或质量不够好 对策：用好的质粒纯化试剂确保质粒DN …
阅读更多 »电转染实验时，对于指数衰减形式的脉冲条件是什么？
对于Entranster-E电转染试剂，当使用0.4cm电转杯时，大多数细胞类型的指数衰减脉冲条件在200-300V的电压范围和800-1000μF的电容范围内。对于0.2 cm电转杯时，其范围分别为80-160 V和800-1000μF。对于使用0.4 cm电转杯的电穿孔实验，测试电压范围为200–30 …
阅读更多 »如何有效提高细胞转染实验效率？
1．选择合适的转染试剂 不同细胞系转染效率通常不同，但细胞系的选择通常是根据实验的需要，因此在转染实验前应根据实验要求和细胞特性选择适合的转染试剂。每种转染试剂都会提供一些已经成功转染的细胞株列表和文献，通过这些资料可选择最适合实验设计的转染试剂。当然，最适合的是高效、低毒的转染试剂。如Entranster …
阅读更多 »哪些因素会造成western-blot发光时发生荧光淬灭？
荧光淬灭是Western Blot发光时常见的现象，即加ECL发光液后立刻可以看到很明显的亮光，但亮光很快就消逝了，压完片后条带却很弱，甚至没有条带，发生这种情况的原因可能有以下几个方面: 1. 抗体浓度太高，局部过多的HRP会快速消耗底物，导致荧光信号过强，条带呈灼烧样。可降低抗体上样量。 2. 抗体浓度太低，荧光信号太弱，可能第一次压片能够获得很弱的条带 …
阅读更多 »细胞转染为什么不能加血清？
传统的转染试剂有一定的细胞毒性，在转染过程由于提高细胞的通透性因而不能在培养基中添加抗生素。如，阳离子脂质体。带正电的脂质体与核酸带负电的磷酸基团形成复合物被细胞内吞。血清中含有大量的蛋白质，在转染过程中，带负电的蛋白质可能干扰阳离子脂质体对核酸的吸附，影响转染效率。另外，使用脂质体等转染试剂时，由于含血清 …
阅读更多 »体内转染与siRNA在病毒性心肌炎小鼠模型中的抗病毒作用研究
Coxsackie Virus属于小RNA 病毒科，肠道病毒（enteroviruses）属，是导致病毒性心肌炎的主要病毒之一，多发于儿童和青少年，可引起急性心力衰竭，部分可发展为扩张性心肌病，严重危害少年儿童健康，目前临床缺乏特异有效的药物。RNA干扰自1998 年《Science》杂志报道以来，已被广泛 …
阅读更多 »如何做好细胞转染实验？
1．选择合适的转染试剂 不同细胞系转染效率通常不同，但细胞系的选择通常是根据实验的需要，因此在转染实验前应根据实验要求和细胞特性选择适合的转染试剂。每种转染试剂都会提供一些已经成功转染的细胞株列表和文献，通过这些资料可选择最适合实验设计的转染试剂。当然，最适合的是高效、低毒、方便、廉价的转染试剂。如英格恩的 …
阅读更多 »悬浮细胞的siRNA转染实验步骤
悬浮细胞的siRNA转染操作步骤，以24孔板siRNA转染为例 1.提前1天细胞种植 悬浮细胞：采用对数生长期的细胞，数量为常规培养细胞数的1/3进行转染实验。如某细胞常规培养的细胞数是6×105，那么就用2×105的细胞进行转染。 2.转染过程 ⑴取0.67ug(50pmol)的siRNA，加入一定量无血清稀释液，充分混匀，制成RNA稀释液，终体积为2 …
阅读更多 »PCR试剂效果图
如图所示，engreen的PCR试剂跑出来的条带清晰，准确，无非特异性扩增条带，是理想的PCR试剂。
阅读更多 »CCK8实验中，如果加入的药物中含有金属，是否会有影响？
金属对CCK8显色有影响。当终浓度为1 Mm 的氯化亚铅、氯化铁、硫酸铜会抑制5%、15%、90%的显色反应，使灵敏度降级。如果终浓度是10 Mm 的话，将会100%抑制。 如需了解更多关于cck8产品的信息，请点击https://www.engreen.com.cn/cck-8-kit
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