英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
1， 质粒的大小和质量 线性化还是超螺旋会影响转染结果：超螺旋质粒的转染效率比线性DNA高得多，特别是瞬时转染。而线性化DNA转染的整合几率高。质粒太大了转染会困难一些。毕竟，相对致密、较小的外源异物被细胞内吞的几率要大一些。如果你的质粒正好比较大，又没有经验，选择特别注明可以转大质粒的转染试剂成功几率会高一些。有的转染试剂还会提供一些 …
阅读更多 »细胞转染效率不可重复怎么办？
转染效率重复性差原因： 细胞融合度不同。保证同样的接种量及同样的时间。 细菌污染。可使用Entranster试剂，培养基可加抗生素，避免细胞污染。 细胞传代次数太高了。可重新复苏一管新的细胞。 血清质量不稳定。用同一批号的血清。
阅读更多 »熬夜改变基因 或诱发慢性病
回放： 最近，《临床内分泌学和新陈代谢期刊》发表了瑞典乌普萨拉大学和卡罗林斯卡医学院科学家的研究成果。他们招募了15名健康的男性志愿者进行睡眠实验，发现一夜不眠后，志愿者生物钟核心基因的表达发生了改变。 疑问： 仅仅通宵一晚就会改变基因表达？睡眠和哪些生命活动有交叉？睡眠时间的长短又与哪些疾病有着密切联系？ 解答： 睡眠受两方面因素影响，即生物的昼夜节律和睡 …
阅读更多 »ECL发光液（enlight）与AMPA受体和巨噬细胞中TNF-α的表达和释放研究
谷氨酸（Glu）是中枢神经系统中一种兴奋性神经递质，并根据其特定的谷氨酸受体发挥多种功能。谷氨酸也是一种营养氨基酸，存在于血液中。谷氨酸受体有两组，它们是离子型受体（IGLURs）和代谢型受体（MGLURs）。IGLURS是根据其对激动剂的选择性分为三个亚型：N-甲基-D-天门冬氨酸受体（NMDA），A-氨基-3-羟基-5-甲基-4-异恶唑丙酸 …
阅读更多 »PCR实验扩增产物出现杂带是什么原因？
可能的原因和对应的解决方案如下： 1.引物用量偏大，引物的特异性不高。应调换引物或降低引物的使用量。 2.循环的次数过多。适当增加模板的量，减少循环次数。 3.酶的用量偏高或酶的质量不好，应降低酶量或调换另一来源的酶。 4.退火温度偏低，退火及延伸时间偏长。应提高退火温度，减少变性与延伸时间，也可采用二种温度的 pcr 扩增。以 2 ℃为梯度设计梯度 PCR …
阅读更多 »western-blot实验成功要点
1. 样品质量。所抽取样品的蛋白含量，蛋白变性是否充分等等，还有，蛋白样品的PH值是否在7~8之间。这会直接影响到样品浓缩的效果。此外，蛋白样品是否降解、目的蛋白是否已抽取充分都会对最终结果的可靠性有影响。 2. 凝胶质量。不连续SDS-PAGE胶对凝胶的要求较高，分离胶的PH值应在8.8左右，而浓缩胶的PH应在6.8左右，最好不要差过0.5个PH单位，因为 …
阅读更多 »western-blot实验关键点
1. 样品质量。所抽取样品的蛋白含量，蛋白变性是否充分等等，还有，蛋白样品的PH值是否在7~8之间。这会直接影响到样品浓缩的效果。此外，蛋白样品是否降解、目的蛋白是否已抽取充分都会对最终结果的可靠性有影响。 2. 凝胶质量。不连续SDS-PAGE胶对凝胶的 …
阅读更多 »western-blot的实验结果的影响因素有哪些？
1. 样品质量。所抽取样品的蛋白含量，蛋白变性是否充分等等，还有，蛋白样品的PH值是否在7~8之间。这会直接影响到样品浓缩的效果。此外，蛋白样品是否降解、目的蛋白是否已抽取充分都会对最终结果的可靠性有影响。 2. 凝胶质量。不连续SDS-PAGE胶对凝胶的要求较高，分离胶的PH值应在8.8左右，而浓缩胶的PH应在6.8左右，最好不要差过0.5个PH单位，因为 …
阅读更多 »CCAA（engreen）与TIPE1通过下调ERK磷酸化抑制乳腺癌的增殖研究
乳腺癌是全世界妇女最常见的恶性肿瘤之一。例如，在发达国家，乳腺癌占所有女性癌症的27%。尽管在包括手术、放疗、化疗、内分泌治疗和靶向治疗在内的治疗策略方面取得了进展，乳腺癌患者的预后仍然很差。迄今为止，已经证明许多分子，如BRCA1（乳腺癌易感基因1）、HER2（人表皮生长因子受体2）和p53参与了乳腺癌的发生和发展。然而，乳腺癌的潜在机制，尤其 …
阅读更多 »如何做好siRNA细胞转染实验？
1.纯化siRNA siRNA的浓度和纯度对转染实验非常重要。为得到高纯度的siRNA，推荐用玻璃纤维结合，洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸，小的寡核苷酸，蛋白和盐离子。注意：化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化（即PAGE胶纯化）。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致siRNA转染实验失败。由于实验环境中RNA酶普遍存在，如皮 …
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