2026年 3 月 17日, 星期二
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Western-blot化学发光实验为什么会出现高背景?

     做Western Blot发光实验经常有“背景太高”问题的出现,要弄清楚“背景太高”的原因,先要知道“背景”是什么,“背景”也是发光,影响发光的因素就会影响背景。     影响发光的因素主要有:1.含HRP的抗体;2.发光试剂;3.和发光试剂反应的杂质,如含杂质的膜。这里面,在很短时间内曝 …

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RNA干扰现象简介

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是近年来生命科学领域最为重大的发现之一。它是指小分子双链RNA可以特异性地降解或抑制同源mRNA表达,从而抑制或关闭特定基因表达的现象。人们只要知道了某种疾病的致病基因,就可以设计出针对该基因mRNA的小分子干扰RNA(Small interfering RNA,siRNA),抑制或封闭该致病基因的表达 …

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怎样有效提高细胞转染实验效率?

1.选择合适的转染试剂       不同细胞系转染效率通常不同,但细胞系的选择通常是根据实验的需要,因此在转染实验前应根据实验要求和细胞特性选择适合的转染试剂。每种转染试剂都会提供一些已经成功转染的细胞株列表和文献,通过这些资料可选择最适合实验设计的转染试剂。当然,最适合的是高效、低毒、方便、廉价的转染试剂。如英格恩的 …

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细胞电转染实验注意事项

1.        选择合适的电场强度 合适的电场强度对于电转染实验非常重要,电场强度不能过高,过高会增加细胞的死亡率;也不能过低,过低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同细胞系具有不同的最佳场强值,实验前应测定所转染细胞系的最佳电场强度。 2.        细胞的选择 用 …

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悬浮细胞不易转染怎么办?

        悬浮细胞是指细胞生长不依赖支持物表面,在培养液中呈悬浮状态生长,如淋巴细胞。在实验室经常会遇到悬浮细胞的转染,其和贴壁细胞转染还是有很大不同的。         目前大多数实验室用的是脂质体类的转染试剂, …

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western-blot实验经验总结

  我做了很久的WB,最大的一个难点感觉在于样品制备上!蛋白的降解有些时候是你想象不到的,可能出奇的糟糕,也可能完全没事~~如果单独做WB的话,感觉以“快速彻底裂解,先变性后保存”的原则比较有效,尽量选择足够强的裂解液,甚至直接给loading buffer裂解,然后取出部分蛋白定量,其余加入loading buffer100度充分变性,再分装保存 …

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哪些因素会造成western-blot发光时发生荧光淬灭?

荧光淬灭是Western Blot发光时常见的现象,即加ECL发光液后立刻可以看到很明显的亮光,但亮光很快就消逝了,压完片后条带却很弱,甚至没有条带,发生这种情况的原因可能有以下几个方面: 1. 抗体浓度太高,局部过多的HRP会快速消耗底物,导致荧光信号过强,条带呈灼烧样。可降低抗体上样量。 2. 抗体浓度太低,荧光信号太弱,可能第一次压片能够获得很弱的条带 …

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从面部识别到行走姿势:解密支付系统的生物识别技术

据科技媒体TechCrunch.com报道,面临着越来越复杂的网络袭击以及各式各样的信用卡诈骗,支付系统产业正尝试将各种生物识别技术加入它们的系统,以加强安全,防止入侵。 根据最近报道,万事达卡正在推出以智能手机“自拍照”验证的面部识别支付服务。目前这个项目正在测试当中。虽然现在用户们仍需同时使用密码,但是不久的将来,仅“自拍照”将足以完成支付。万事达卡表示 …

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western-blot实验过程中应注意的几个方面

1.       样品质量。所抽取样品的蛋白含量,蛋白变性是否充分等等,还有,蛋白样品的PH值是否在7~8之间。这会直接影响到样品浓缩的效果。此外,蛋白样品是否降解、目的蛋白是否已抽取充分都会对最终结果的可靠性有影响。 2.       凝胶质量。不连续SDS-PAGE胶对凝胶的 …

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