英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
Western Blot发光经常有“背景太高”问题，导致“背景高”的原因有很多，主要有以下几个方面： 1. 抗体浓度过高，洗涤不充分，可以造成抗体在膜上的非特异结合，导致高背景。可通过降低抗体稀释度，增加洗膜次数和Buffer用量，或在Wash Buffer中添加终浓度0.05%的Tween-20加以改善。 2. 封闭不充分，会造成抗体在膜上的非特异结合，导 …
阅读更多 »体内转染（entranster）与fbxw5减少可减轻脊髓损伤研究
外伤性脊髓损伤（SCI）是造成死亡和终身残疾的主要原因。然而，对脊髓损伤的病理过程还没有完全了解。F-BOX/WD重复序列包含蛋白5（FBXW5），是scf型E3泛素连接酶复合物的一个亚单位，在调节各种病理方面具有重要作用。然而，对于fbxw5对SCI进展的影响知之甚少。 现分享一篇体内转染（entranster）与fbxw5减少可减轻脊髓损伤 …
阅读更多 »miRNA转染（Entranster）与白细胞介素IL-23受体和甲状腺炎研究
Hashimoto甲状腺炎（HT）是一种典型的器官特异性自身免疫性疾病，其特征是自身对甲状腺抗原的耐受性降低。白细胞介素IL-23受体（IL-23R）越来越被认为是自身免疫性疾病的一个关键点，包括Hashimoto甲状腺炎（HT）。然而，调节IL-23R表达的分子机制尚不清楚。现分享一篇miRNA转染（Entranster-R4000）与白细 …
阅读更多 »细胞转染效率低的原因是什么？
转染效率低的原因可从以下几方面找： 1.质粒DNA或混和液中含有血清。 对策：用无血清培养基或Opti-MEM培养基。 2.质粒DNA和转染试剂的比率不是最优 对策：对大多数细胞而言，质粒DNA和转染试剂的比例为1:2-1:3，一般要做优化实验，比例从1:0.5-1:5 逐一检测。 3.质粒DNA 已部分降解或质量不够好 对策：用好的质粒纯化试剂确保质粒DN …
阅读更多 »有哪些因素可以影响western-blot的实验结果？
1. 样品质量。所抽取样品的蛋白含量，蛋白变性是否充分等等，还有，蛋白样品的PH值是否在7~8之间。这会直接影响到样品浓缩的效果。此外，蛋白样品是否降解、目的蛋白是否已抽取充分都会对最终结果的可靠性有影响。 2. 凝胶质量。不连续SDS-PAGE胶对凝胶的要求较高，分离胶的PH值应在8.8左右，而浓缩胶的PH应在6.8左右，最好不要差过0 …
阅读更多 »如何提高病毒感染实验效率？
可使用病毒感染增强剂envirus提高病毒的感染效率，下面以慢病毒为例，说一下实验过程。 1.提前一天细胞铺板 提前一天将细胞种植在24孔板中，以感染时细胞融合度在50%左右为宜(悬浮细胞根据需要调整，不要采用过高的细胞密度)。 2.感染 ⑴将2ul的Envirus-LV用25μl无血清稀释液稀释，充分混匀，制成Envirus-LV稀释液。4℃静置5分钟。 …
阅读更多 »western-blot实验结果影响因素
1. 样品质量。所抽取样品的蛋白含量，蛋白变性是否充分等等，还有，蛋白样品的PH值是否在7~8之间。这会直接影响到样品浓缩的效果。此外，蛋白样品是否降解、目的蛋白是否已抽取充分都会对最终结果的可靠性有影响。 2. 凝胶质量。不连续SDS-PAGE胶对凝胶的 …
阅读更多 »siRNA转染实验注意事项
1.纯化siRNA siRNA的浓度和纯度对转染实验非常重要。为得到高纯度的siRNA，推荐用玻璃纤维结合，洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸，小的寡核苷酸，蛋白和盐离子。注意：化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化（即PAGE胶纯化）。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致siRNA转染实验失败。由于实验环境中RNA酶普遍存在，如皮 …
阅读更多 »RNA细胞转染效率低的原因是什么？
RNA转染效率低，可能的原因： · 转染试剂不适合。建议选择RNA专用转染试剂，如Entranster试剂。 · 转染试剂和RNA的量不够，或者比例不对。优化实验条件，调整试剂和RNA用量，优化二者比例。 · 检测时间有问题。适当调整检测时间。 · RNA质量问题。选择纯度高的RNA。 · 细胞状态不佳。调整细胞状态，调整细胞融合度。
阅读更多 »怎样做好DNA转染实验？
我认为，要想做好质粒DNA细胞转染实验，应注意以下几点： 1， 质粒的大小和质量 线性化还是超螺旋会影响转染结果：超螺旋质粒的转染效率比线性DNA高得多，特别是瞬时转染。而线性化DNA转染的整合几率高。质粒太大了转染会困难一些。毕竟，相对致密、较小的外源异物被细胞内吞的几率要大一些。如果你的质粒正好比较大，又没有经验，选择特别注明可以转 …
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