其它

转染效率重复性差原因： 细胞融合度不同。保证同样的接种量及同样的时间。 细菌污染。可使用Entranster试剂，培养基可加抗生素，避免细胞污染。 细胞传代次数太高了。可重新复苏一管新的细胞。 血清质量不稳定。用同一批号的血清。

细胞转染效率低的原因可从以下几方面找： 1.质粒DNA或混和液中含有血清。 对策：用无血清培养基或Opti-MEM培养基。 2.质粒DNA和转染试剂的比率不是最优 对策：对大多数细胞而言，质粒DNA和转染试剂的比例为1:2-1:3，一般要做优化实验，比例从1:0.5-1:5 逐一检测。 3.质粒DNA 已部分降解或质量不够好 对策：用好的质粒纯化试剂确保质粒 …

       不一样，悬浮细胞与贴壁细胞相比较难染色。对于贴壁细胞，一般加入CCK8 培养1-4 小时吸光度已经很高，但对于悬浮细胞则可能吸光度较低，可以通过延长CCK8 的加入时间或增加细胞数量来解决。 如需了解更多关于cck8产品的信息，请点击cuturl(‘https://www.engreen.co …

1. 样品质量。所抽取样品的蛋白含量，蛋白变性是否充分等等，还有，蛋白样品的PH值是否在7~8之间。这会直接影响到样品浓缩的效果。此外，蛋白样品是否降解、目的蛋白是否已抽取充分都会对最终结果的可靠性有影响。 2. 凝胶质量。不连续SDS-PAGE胶对凝胶的要求较高，分离胶的PH值应在8.8左右，而浓缩胶的PH应在6.8左右，最好不要差过0.5个PH单位，因为 …

基本方案2  蛋白A交联琼脂糖凝胶亲和层析 蛋白A 通常用于人（除lgG3外；小鼠lgG1 结合力也较弱）、兔、豚鼠和猪抗体的纯化。 材料 腹水或MAb 上清 PBS, pH8.0 和pH 7.3 1mol/L NaOH 蛋白A 交联琼脂糖凝胶CL-4B 0.1mol/L 柠檬酸， pH 按照所分离的抗体亚类的需要而定（步骤3) 10% (m/V) NaN3 …

· 滤纸、胶、膜之间的大小，一般是滤纸>=膜>=胶。 · 滤纸、胶、膜之间千万不能有气泡，气泡会造成短路。 · 因为DEPF膜的疏水性，膜必须首先在甲醇中完全浸湿。而且在以后的操作中，膜也必须随时保持湿润（干膜法除外）。 · 滤纸可以重复利用，上层滤纸（靠膜）内吸附有很多转移透过的蛋白质，所以上下滤纸一定不能弄混，在不能分辨的情况下，可以将靠胶滤 …

      RNA干扰（RNA　interference，RNAi）是近年来生命科学领域最为重大的发现之一。它是指小分子双链RNA可以特异性地降解或抑制同源mRNA表达,从而抑制或关闭特定基因表达的现象。人们只要知道了某种疾病的致病基因，就可以设计出针对该基因mRNA的小分子干扰RNA（Small interferin …

不合适的电场强度 合适的电场强度对于电转染实验非常重要，电场强度不能过高，过高会增加细胞的死亡率；也不能过低，过低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同细胞系具有不同的最佳场强值，实验前应测定所转染细胞系的最佳电场强度。 细胞选择错误 用于电转的细胞一般选取处于对数生长期的细胞（15代以内，传代后2d）。因为处于对数生长期的细胞分裂旺盛，表面结构致密比稳定 …

RNA转染效率低，可能的原因： 1. 转染试剂不适合。建议选择RNA专用转染试剂，如Entranster-R4000，纳米材料，毒性低，效率高。 2. 转染试剂和RNA的量不够，或者比例不对。优化实验条件，调整试剂和RNA用量，优化二者比例。 3.检测时间有问题。适当调整检测时间。 4. RNA质量问题。选择纯度高的RNA。 5. 细胞状态不佳。调整细胞状态 …

问：siRNA导入细胞有哪些方法，哪种最好？ 答：siRNA导入细胞有以下几种方法：化学转染技术、电穿孔法、磷酸钙共沉淀技术、显微注射和载体导入技术。选择时应该依据实验条件考虑以下因素：细胞对转入方式的承受能力、细胞对病毒侵染的易感性、细胞的生长特性等。对贴壁细胞来说化学转染技术是最为常用的方法，而对悬浮细胞则采用电穿孔法效果较好。 问：哪种转染试剂效果好？ …