膀胱癌(BC)是一种由膀胱中某些细胞不受控制的恶性增殖引起的疾病。在中国泌尿生殖系统肿瘤发病率排名第一,在西方仅次于前列腺癌。随着根治性BC切除综合治疗的不断进展,临床疗效有了很大提高,但晚期BC术后易发生复发转移,其5年生存率仍徘徊在45%左右。化疗能有效抑制前列腺癌的复发和转移,但耐药制约了其临床应用,严重影响了临床疗效。众所周知,BC的化 …
阅读更多 »体内转染与mir‐208b通过靶向cdkn1a调节细胞周期并促进骨骼肌细胞增殖研究
骨骼肌是人体内最丰富的组织。骨骼肌细胞发育复杂,受多种因素影响。大量的mirRNA(micrornas)被认为是肌发生的关键调节因子。MIR-208b是一种肌肉特异性的mirRNA,据报道与纤维类型测定有关。然而,MIR-208b是否对肌肉细胞增殖有影响尚不清楚。现分享一篇体内转染(entranster)与mir‐208b通过靶向cdkn1a调节细胞周期并促 …
阅读更多 »mRNA细胞转染实验步骤
下面以Entranster-R4000试剂为例,说一下mRNA转染步骤(24孔板) 1.提前1天细胞种植 贴壁细胞:提前一天将细胞种植在24孔板中,以转染时细胞汇合度(Confluence)在30%左右为宜,转染前全培养基总量为0.45ml。 悬浮细胞:采用对数生长期的细胞,数量为常规培养细胞数的1/3进行转染实验。如某细胞常规培养的细胞数是6×105,那么 …
阅读更多 »动物体内转染试剂可以进行哪些研究?
动物体内转染试剂entranser-in vivo专用于动物体内转染,可直接转染DNA或者RNA到动物体内进行: ● 基因治疗的动物体内研究 ● RNA干扰的动物体内研究 ● 蛋白功能的动物体内研究
阅读更多 »体内转染与异甘草素和大鼠早期脑损伤研究
脑内出血(Intracerebralhemorrhage,ICH)可引起有效的氧化应激反应和炎症过程,异甘草素(Isoliquiritigenin)是一种类黄酮物质,可以激活核因子E2相关因子2(Nrf2)介导的抗氧化系统,负调控核因子B(NF-κBκκ)和NOD受体家族。现分享一篇体内转染(Entranster)与异甘草素和大鼠早期脑损伤研究的文献,以供参 …
阅读更多 »体内转染(Entranster)与TAT和小鼠下丘脑运动及昼夜节律基因表达研究
反式激活子(Transactivator,Tat),HIV-1的调节蛋白,可促进HIV病毒快速复制,在HIV-1感染中起着非常重要的作用。对TAT蛋白功能的研究主要集中在抑制免疫系统、促进血管内皮细胞生长和神经系统损伤方面。迄今为止,很少有研究涉及Tat在昼夜节律中的作用。现分享一篇体内转染(Entranster)与TAT和小鼠下丘脑运动及昼夜节律基因表达研 …
阅读更多 »lonza电转,同时电转DNA和RNA,其中RNA的转染效率降低很多,单独RNA,效率很高;共转的时候,RNA的总量是一样的,一个GFP的mRNA,所以可以通过荧光判断表达量,但是当加入DNA后,GFP的荧光就非常差了,用的程序是适用于mRNA的一个程序,有什么建议吗
单独电转mRNA(GFP)信号很好,但一旦同时把DNA一起电转,GFP荧光显著下降。这个往往不是“挤占表达资源”这么简单,更多是由“电转参数 + 细胞先天免疫反应 + 总核酸/盐负载”三方面共同导致。给你一个可操作、优先级排序的排障与优化清单(不需要额外设备就能尝试): 先做两件最快见效的事 把DNA量往下砍 10–100×(起始试 10 ng~100 ng …
阅读更多 »质粒被酶切过还可以电转吗?
可以,但得分情况来看: 如果质粒是线性化了(即被酶切成线状DNA): 可以电转,但是效率明显低于超级螺旋质粒(超螺旋 plasmid,通常是未切割、天然状态下的质粒结构)。 线性质粒在细胞内容易被核酸酶降解,稳定性和转化成功率比超螺旋质粒低很多。 有些时候,比如做基因组编辑(CRISPR knock-in)、整合型表达载体(需要基因组插入时),反而故意使用线 …
阅读更多 »ECL发光液与低浓度TBBPA促进子宫内膜癌细胞侵袭和迁移研究
四溴双酚A(TBBPA)是目前全球生产量和使用量最大的溴代阻燃剂之一, 也是新型潜在的拟增热点POPs和环境内分泌干扰物, 被广泛应用于电子电器产品、纺织品、泡沫家具及建筑材料等, 以提高阻燃性。目前一些研究表明, 在空气、土壤、水体和水体沉积物等环境中已检测到TBBPA的存在。 TBBPA已经被国际癌症研究机构(IARC)列为致癌物质 …
阅读更多 »siRNA答疑专题总结(上)
Q1:如果慢病毒载体中没有抗性标记,只有GFP,请问还能筛选稳转的细胞传代培养吗? A1:采用流式分选是流式细胞仪的一个功能,有流式细胞仪就可以了。一般实验室对流式都有专门的人员操作,不需要自己动手。由于没有抗性,需要注意分选过程的无菌操作。 Q2:RNA干扰如果用慢病毒做稳转的细胞株,什么样的目的RNA都可以用来干扰来做稳转的细胞株吗,目的RNA所编码蛋白 …
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