英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
吸入糖皮质激素，主要是皮质类固醇，目前治疗哮喘最有效的方法。然而，这种疗法去无法阻止重症哮喘或者顽固性哮喘的发展，被称作是非嗜酸细胞性哮喘（NEA）。NEA的特点是中性粒细胞（PMN）数目增加，并伴有单核细胞/巨噬细胞、肥大细胞和淋巴细胞相关的炎症反应。现分享一篇体内转染（Entranster-in vivo）与中性粒细胞气道炎症研究的文献，以供参考。
阅读更多 »ECL发光液与重组弓形虫CDPK3接种对实验性弓形虫保护性免疫研究
弓形虫是一种普遍存在的、专性的细胞内病原体，可感染包括人在内的几乎所有的恒温动物。目前尚未有特效药物或疫苗能够防控弓形虫病。钙依赖性蛋白激酶(CDPKs)广泛的存在于植物、绿藻和顶复门原虫中,且不存在哺乳动物中。CDPKs在钙离子的调控下,主要参与入侵、胞内增值、逸出、运动和蛋白分泌等重要生物功能的调节。由于其不存在于哺乳动物中,CDPKs成为 …
阅读更多 »怎样提高悬浮细胞的siRNA转染效率？
悬浮细胞是指细胞生长不依赖支持物表面，在培养液中呈悬浮状态生长，如淋巴细胞。在实验室经常会遇到悬浮细胞的转染，其和贴壁细胞转染还是有很大不同的。 目前大多数实验室用的是脂质体类的转染试剂，脂质体转染是基于电荷吸引原理，先形成 …
阅读更多 »体内转染（Entranster）与HNRNPC在乳腺癌细胞中作用研究
在胶质母细胞瘤、肝细胞癌、黑色素瘤和肺癌等多种肿瘤或肿瘤细胞系中，均可观察到异质核糖核蛋白C（HNRNPC）的异常上调。HNRNPC以其在RNA剪接、序列非特异性RNA输出、RNA表达、稳定性、30端加工和翻译中的调节作用而闻名。的确，在这些涉及HNRNPC的调节事件中，涉及多种癌症相关基因的处理，包括BRCA、uPAR、MALAT1、PDCD4、cMyc。 …
阅读更多 »shRNA转染实验步骤
下面以Entranster-R4000试剂为例，说一下shRNA转染步骤（24孔板） 1.提前1天细胞种植 贴壁细胞：提前一天将细胞种植在24孔板中，以转染时细胞汇合度（Confluence）在30％左右为宜，转染前全培养基总量为0.45ml。 悬浮细胞：采用对数生长期的细胞，数量为常规培养细胞数的1/3进行转染实验。如某细胞常规培养的细胞数是6×105，那 …
阅读更多 »慢病毒感染贴壁细胞实验方法
1.提前一天细胞铺板 提前一天种植细胞，以感染时细胞融合度在50%左右为宜(悬浮细胞根据需要调整，不要采用过高的细胞密度)。 感染实验 ⑴将EnvirusTM-LV用无血清稀释液稀释(用量参见下表)，充分混匀，制成增强剂稀释液。 ⑵将病毒浓缩液用无血清稀释液稀释(用量参见下表)，充分混匀，制成病毒稀释液。 注：由于病毒浓度情况不同，具体病毒浓缩液用量酌情依据 …
阅读更多 »请问一下，转染带荧光标记的NC，转染后需要拍照看转染效率，在转染后4-6小时换液吗？
一般原则： 1.转染试剂对细胞有毒性。因此通常会建议在 4–6小时后更换新鲜培养基，以减轻毒性，保证细胞状态。 2.换液是否影响转染效率？ 针对你要拍荧光观察转染效率的情况： 如果只是想观察转染效率，一般建议 不要太早换液，至少等到荧光信号开始显现（通常24–48小时）再拍照。 如果细胞状态不好（明显发黄、漂浮、死亡增加），建议在 4–6小时换液，以保证细胞 …
阅读更多 »siRNA细胞转染应注意的事项
为了达到高的转染效率，在转染实验过程中，需要注意以下几点： 1.纯化siRNA siRNA的浓度和纯度对转染实验非常重要。为得到高纯度的siRNA，推荐用玻璃纤维结合，洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸，小的寡核苷酸，蛋白和盐离子。注意：化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化（即PAGE胶纯化）。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致 …
阅读更多 »Frontiers in Neuroscience | 厦门大学医学院：如何才能有效缓解神经炎症疼痛？
《Frontiers in Neuroscience》期刊上新发表的神经相关文章“Long Non-coding RNA Uc.48+ Small Interfering RNA Alleviates Neuroinflammatory Hyperalgesia in Gp120-Treated Rats v …
阅读更多 »RNA转染（Entranster）与SASH1和黑色素细胞研究
在小鼠胚胎中，成黑素细胞起源于背神经脊，沿着表皮和真皮之间的背侧通路迁徙，在真皮中分散，最终进入表皮，并广泛扩散。现分享一篇RNA转染（Entranster）与SASH1和黑色素细胞研究的文献，以供参考。
阅读更多 »