英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
根据细胞在液体或半固体培养基中的生长情况分类，生长特征只是功能上的描述，并与细胞来源有关。 悬浮和贴壁生长是细胞的特性和培养条件，有些细胞可以以两种方式进行。 图1 制备分泌抗特定抗原X 的单克隆抗体的杂交瘤细胞筛选培养基中加入了氨甲啋呤抑制剂，可以抑制核昔酸正常生物合成的药物，所以细胞必须采用其他途径合成核酸，而只有杂交瘤细胞株可以采取这种途径合成核昔 …
阅读更多 »在共转染中，怎么看质粒的表达能力？通过什么方式呢？
共转染实验中，判断质粒的表达能力通常有几种常见的方式，具体方法取决于你的实验设计和质粒中所包含的标记。以下是几种常用的检测方式： 1. 荧光标记 如果质粒中包含了荧光标记基因（如GFP、RFP等），通过显微镜直接观察荧光信号是最直观的方式。这种方法不仅可以评估质粒的转染效率，还可以间接反映出质粒的表达能力。 优势：快速、简便，能够同时评估转染效率和蛋白表达。 …
阅读更多 »DNA转染效率影响因素
细胞DNA转染效率的影响因素 1.细胞密度 一般来说，当细胞密度达到60%～80%时进行转染可以取得较高的转染效率，过低或过高都会影响转染效果。 2.细胞状态 这点非常关键，很多时候传代次数太少或者太多都将导致细胞对转染试剂敏感度的改变。因此，为了提高转染效率以及转染稳定性、降低细胞毒性，应尽量使用适度传代的细胞系，并在不同次实验时保持细胞传代次数的 …
阅读更多 »RNA转染实验效率低的原因
RNA转染效率低，可能的原因： 1. 转染试剂不适合。建议选择RNA专用转染试剂，如Entranster。 2. 转染试剂和RNA的量不够，或者比例不对。优化实验条件，调整试剂和RNA用量，优化二者比例。 3.检测时间有问题。适当调整检测时间。 4. RNA质量问题。选择纯度高的RNA。 5. 细胞状态不佳。调整细胞状态，调整细胞融合度。
阅读更多 »血清对于细胞转染效率有什么影响？
血清中含有大量的蛋白质，在转染过程中，带负电的蛋白质可能干扰阳离子脂质体对核酸的吸附，影响转染效率。另外，使用脂质体等转染试剂时，由于含血清转染会将血清中的蛋白带入细胞，引发细胞毒性，导致转染效率降低，故不能有血清转染。这些转染试剂要求在转染前换无血清培养基，转染后4-6h在更换成有 …
阅读更多 »电转染实验时，细胞密度是多少合适？
进行电穿孔实验时.，需确定每种细胞类型的最佳细胞密度，以使电穿孔效率最大化。对于Entranster-E电转染试剂来说，在含电转试剂的终体系中，电穿孔时的细胞密度一般在1-10×106细胞/ml范围内。对于悬浮细胞，最好是接近10×106细胞/ml的高细胞密度。对于贴壁细胞，建议的细胞密度为1-5×106 …
阅读更多 »siRNA细胞转染效率低下的原因
1. RNA与转染试剂比例不佳 由于RNA序列差异、合成条件不同以及是否带有荧光等标记，决定了RNA和转染试剂在不同情况下会有不同的最佳条件，建议先进行预实验优化。 2. 细胞密度不佳 调整细胞密度到转染时汇合度为20-40%。成功转染siRNA的细胞会产生目标基因表达下调，但未成功转染的细胞却不受影响，这 …
阅读更多 »如何做好细胞转染实验？
1．选择合适的转染试剂 不同细胞系转染效率通常不同，但细胞系的选择通常是根据实验的需要，因此在转染实验前应根据实验要求和细胞特性选择适合的转染试剂。每种转染试剂都会提供一些已经成功转染的细胞株列表和文献，通过这些资料可选择最适合实验设计的转染试剂。当然，最适合的是高效、低毒、方便、廉价的转染试剂。如英格恩的 …
阅读更多 »流式检测细胞周期操作步骤
流式检测细胞周期操作步骤 1. 细胞培养： 取对数生长期的细胞，按1×106cells/ mL以1mL接种24孔板或2mL接种于6孔板内，进行所需的处理（比如加入药物），特定时间后终止培养，进行下一步的实验。 2. 细胞固定： 800rpm离心5min，收集细胞沉淀，弃上清，用预冷PBS洗涤两次，加入预冷75%乙醇，于4℃固定4h以上。 3. 细胞染色： 1 …
阅读更多 »哪种RNA转染试剂效果更好？ Turbofect or EntransterTM-R4000？
近期，上海公卫临床研究中心的一位研究生应用两种转染试剂Turbofect transfection reagent（Thermo）和 EntransterTM-R4000（Engreen）进行了一次RNA转染比较。比较情况如下： 实验方法 转染试剂：Turbofect transfection reagent（Thermo）和 EntransterTM-R4 …
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