英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
关于细胞的电转染实验，现提出以下几点建议供大家参考： 1. 选择合适的电场强度 合适的电场强度对于电转染实验非常重要，电场强度不能过高，过高会增加细胞的死亡率；也不能过低，过低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同细胞系具有不同的最佳场强值，实验前应测定所转染细胞系的最佳电场强度。 2. 选择合适的细胞 用于 …
阅读更多 »siRNA转染至细胞有哪些方法？
siRNA导入细胞有以下几种方法：化学转染技术、电穿孔法、磷酸钙共沉淀技术、显微注射和载体导入技术。选择时应该依据实验条件考虑以下因素：细胞对转入方式的承受能力、细胞对病毒侵染的易感性、细胞的生长特性等。对贴壁细胞来说化学转染技术（Entranster）是最为常用的方法，而对悬浮细胞则采用电穿孔法效果较好 …
阅读更多 »siRNA细胞转染注意事项
为了达到高的转染效率，在转染实验过程中，需要注意以下几点： 1.纯化siRNA siRNA的浓度和纯度对转染实验非常重要。为得到高纯度的siRNA，推荐用玻璃纤维结合，洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸，小的寡核苷酸，蛋白和盐离子。注意：化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化（即PAGE胶纯化）。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致 …
阅读更多 »电转染实验过程中易出现的问题
不合适的电场强度 合适的电场强度对于电转染实验非常重要，电场强度不能过高，过高会增加细胞的死亡率；也不能过低，过低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同细胞系具有不同的最佳场强值，实验前应测定所转染细胞系的最佳电场强度。 细胞选择错误 用于电转的细胞一般选取处于对数生长期的细胞（15代以内，传代后2d）。因为处于对数生长期的细胞分裂旺盛，表面结构致密比稳定 …
阅读更多 »如何制备血清减量或无血清培养基？
目前，人们普遍认可单一类型细胞的最合乎生理的培养基是添加了蛋白质的、并且含有适当浓度的各种成分以及细胞外基质组分的限定培养基。 材料 基础营养培养基，如DMEM 营养物质：无机盐，氨基酸，维生素 微量元素 添加剂：生长因子和激素，其他各种培养基成分（见表1) 凭经验先选用特别适合某种细胞生长的培养基，减少未限定培养基成分的浓度，直至细胞增殖能力降低，但活力 …
阅读更多 »测定病毒滴度时，是使用 HEK293 细胞，还是用目的细胞？
测定病毒滴度时，是否可以直接使用 HEK293 细胞，取决于你使用的病毒类型和实验目的。一般来说： 如果是腺病毒或慢病毒，HEK293 细胞（特别是 HEK293T 细胞）通常是不错的选择，因为它们表达病毒包装过程中需要的辅助因子（如腺病毒的 E1A/E1B 或慢病毒的 VSV-G），可以有效地被感染并产生明显的病毒效应。因此，很多实验室会用 293 细胞测 …
阅读更多 »嘌呤霉素筛选标记的病毒滴定 Protocol
关于使用嘌呤霉素筛选标记的慢病毒或逆转录病毒进行病毒滴定的 protocol，整理了一个常用且较为权威适用于慢病毒系统： 【嘌呤霉素筛选法的病毒滴定 Protocol】 原理简述： 将病毒感染宿主细胞，使用嘌呤霉素筛选，仅有成功整合了抗性基因的细胞能存活。最后通过计数存活细胞（克隆或整体密度）来估算病毒滴度。 实验材料： 病毒上清； HEK293T 或其他易 …
阅读更多 »细胞转染效率不可重复怎么办？
转染效率重复性差原因： 细胞融合度不同。保证同样的接种量及同样的时间。 细菌污染。可使用Entranster试剂，培养基可加抗生素，避免细胞污染。 细胞传代次数太高了。可重新复苏一管新的细胞。 血清质量不稳定。用同一批号的血清。
阅读更多 »RNA细胞转染实验注意事项
进行RNA细胞转染实验时，应注意以下几点： 1.纯化RNA 在转染前要确认RNA的大小和纯度。为得到高纯度的RNA，推荐用玻璃纤维结合，洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸，小的寡核苷酸，蛋白和盐离子。注意：化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化（即PAGE胶纯化）。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致RNA实验失败。由于实验环境中R …
阅读更多 »为什么entranster试剂可以进行有血清细胞转染？
使用脂质体等转染试剂时，由于含血清转染会将血清中的蛋白带入细胞，引发细胞毒性，导致转染效率降低，故不能有血清转染。EntransterTM只浓缩包裹核酸不会将血清带入细胞，所以可以有血清转染，同时由于血清的存在，有利于细胞的状态维护，故能提高转染效率。
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