英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
1.纯化siRNA siRNA的浓度和纯度对转染实验非常重要。为得到高纯度的siRNA，推荐用玻璃纤维结合，洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸，小的寡核苷酸，蛋白和盐离子。注意：化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化（即PAGE胶纯化）。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致siRNA转染实验失败。由于实验环境中RNA酶普遍存在，如皮 …
阅读更多 »电转染实验时，细胞密度是多少合适？
进行电穿孔实验时.，需确定每种细胞类型的最佳细胞密度，以使电穿孔效率最大化。对于Entranster-E电转染试剂来说，在含电转试剂的终体系中，电穿孔时的细胞密度一般在1-10×106细胞/ml范围内。对于悬浮细胞，最好是接近10×106细胞/ml的高细胞密度。对于贴壁细胞，建议的细胞密度为1-5×106 …
阅读更多 »如何选择哺乳动物高效表达载体
选择适合哺乳动物细胞的高效表达载体时，通常需要考虑以下几个关键因素： 1. 目标蛋白的特性 蛋白大小和复杂性：如果你的目标蛋白比较大或具有复杂的后期修饰（如糖基化、磷酸化等），你需要确保载体能支持这些修饰。哺乳动物细胞通常用于表达这种需要后修饰的蛋白。 表达水平：有些载体可以提高蛋白表达的水平。你可以根据实验需要选择一个具有高表达效率的载体。 2. 选择合适 …
阅读更多 »Hela细胞的电转染条件是什么？
使用Entranster-E电转液与指数衰减脉冲电转仪时Hela细胞的电转染条件是： 对于0.2 cm电转杯，细胞密度为3×10^6 cells/ml，DNA用量为2μg，电转液体积为100μl，电压为130V， 电容为950μF。 对于0.4 cm电转杯，细胞密度为3×10^6 cells/ml，DNA用量为5μg，电转液体积为250μ …
阅读更多 »小鼠大脑皮层神经元原代培养步骤
小鼠大脑皮层神经元原代培养步骤： 1、 于无菌条件下切取鼠头并以75%酒精浸泡1min，解剖出完整鼠脑； 2、 预冷解剖液中分离去除软膜、血管、取大脑皮质漂洗，用眼科剪将皮质反复剪切成碎块； 3、 移入培养皿中，吸除解剖液加入0.25%胰蛋白酶2m1，37℃培养箱中消化30min； 4、&nb …
阅读更多 »电转染实验影响因素
1 电场参数 电场是电转染的重要因素，细胞在电场的作用下，膜通透性增加或是形成小孔，以完成转染过程。因此电场强度是应该被优化的主要参数。电场强度不能过高，过高会增加细胞的死亡率；也不能过低，过低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。因此，一个适宜的电场强度至关重要。 不同细胞系具有不同的最佳场强值，其确定方法除了实验直接测定比较不同场强下转染率的高低外，还可以 …
阅读更多 »藻类细胞电转和动物细胞电转用的仪器有区别吗
是的，藻类细胞和动物细胞电转所用的仪器通常有一些区别。具体来说，电转仪器的选择和设置参数会因细胞类型的不同而有所不同，以下是一些主要的差异： 1. 电转仪器的类型 藻类细胞通常会选择高压短时脉冲电转仪，因为藻类细胞多有细胞壁，且结构较坚硬，需要较高的电压来突破细胞壁，使 DNA 进入细胞。 动物细胞（尤其是哺乳动物细胞）一般选择低压长时脉冲电转仪，因动物细胞 …
阅读更多 »如何达到较高的RNA转染效率？
可从以下几方面进行优化： 1.纯化RNA 在转染前要确认RNA的大小和纯度。为得到高纯度的RNA，推荐用玻璃纤维结合，洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸，小的寡核苷酸，蛋白和盐离子。注意：化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化（即PAGE胶纯化）。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致RNA实验失败。由于实验环境中RNA酶普遍存在，如 …
阅读更多 »细胞电转染实验效率不理想的原因
1. 不合适的电场强度 合适的电场强度对于电转染实验非常重要，电场强度不能过高，过高会增加细胞的死亡率；也不能过低，过低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同细胞系具有不同的最佳场强值，实验前应测定所转染细胞系的最佳电场强度。 2. 细胞选择错误 用于电转的细胞一般选取处于对数生长期 …
阅读更多 »免疫细胞的制备方法和注意事项
随着免疫细胞生物学和分子生物学的快速发展,免疫治疗已成为肿瘤患者放、化疗和手术后辅助治疗的重要手段之一。 过继免疫治疗(adoptive cellular immunotherapy,ACI)是近年来引起关注的免疫治疗方法。ACI 是通过将具有抗肿瘤活性,能直接或间接介导抗肿瘤效应的免疫细胞注肿瘤宿主体内的一种治疗方法。ACI 应用的免疫细胞主要为 T 细胞 …
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